verslag toegepaste biochemie: enzym kinetiek van bacterieel a-amylase
176 vues 6 fois vendu
Cours
Toegepaste biochemie
Établissement
Hogeschool Utrecht (HU)
Dit bestand bevat:
- de uitvoering en verslag legging van vaardigheid 3 en 4 (enzym kinetiek) van toegepaste biochemie
- verslag enzym kinetiek van bacterieel a-amylase.
voor dit verslag is een 7,5 behaald.
Het doel van het experiment is het pH optimum berekenen en de enzymactiviteit van α-
amylase bepalen bij verschillende substraat concentraties.
Het enzym a-amylase is een hydrolase enzym die aanwezig is in onder anderen humaan
speeksel, dit enzym heeft als taak: zetmeel doormiddel van hydrolyse in korte stukjes
“knippen”. Dit enzym komt echter ook bacterieel voor. In dit onderzoek is ervoor gekozen om
met bacterieel a-amylase te werken, er is voor de bacteriële variant gekozen vanwege
Covid-19 maatregelen.
De opzet van dit onderzoek bestaat uit het maken van verscheidene oplossingen met een
wisselende substraat concentraties. Door middel van het bacterieel enzym α-amylase wordt
de omzetting van het substraat in werking gezet. Na enkele minuten wordt de reactie
beëindigd door een HCl oplossing. Door gebruik te maken van een blauw complex dat
gevormd wordt door toevoeging van een jodide oplossing kan er worden gekeken hoeveel
omzetting er heeft plaats gevonden wanneer er gebruik gemaakt wordt van een UV-VIS
analyse.
Dit wordt bepaald met behulp van de Michaelis Menten kinetiek en een lineweaver burkplot.
In deze grafieken kan de Vmax en de km worden bepaald.
Naar verwachting ligt het pH optimum van het bacterieel enzym α-amylase rond de pH 7,
bedragen de Michaelis-Menten parameters een positief getal en wordt het zetmeel door het
enzym omgezet.
, VCHC-09 en VCHC-07
Toegepaste biochemie: ”Enzymkinetiek”
SAMENVATTING
Het doel van het experiment is het pH optimum berekenen en de enzymactiviteit van
bacterieel α-amylase bepalen, bij verschillende substraat concentraties, en het bepalen van
de Michaelis-Menten parameters km en Vmax. Dit wordt via een UV-VIS geanalyseerd.
In dit experiment zijn er verschillende oplossingen gemaakt die andere concentraties
bedragen. Aan de hand van de gemeten absorptie van een UV-VIS analyse, kan er een
Michaelis-Menten plot en een Lineweaver Burk plot worden gemaakt. Beide methoden
worden gebruikt voor de analyse van dit experiment.
Uit dagdeel één, figuur 2, blijkt dat het pH optimum zich rond de pH 6 bevindt.
Bij het tweede deel van het experiment zijn de extincties gemeten van de enzymactiviteit na
3 minuten. Hieruit kwamen de waardes voor de Vmax en Km naar voren. Deze bedragen
voor Km 10,6 en voor Vmax 0,055 ΔA/min volgens de Michaelis-Menten plot.
Gekeken naar de Lineweaver Burk plot kan de Km en de Vmax nauwkeuriger worden
benaderd. Hierin komt naar voren dat de km -174,89 mM bedraagt, en de Vmax -0,3211
mM/s.
Echter zijn dit onaannemelijke waarden die niet aan de verwachting voldoen. Daarom wordt
dit onderzoek als niet betrouwbaar gesteld. Er wordt aangeraden om dit onderzoek te
vervolgen, en de metingen in triplo uit te voeren om zo eventuele onwaarschijnlijkheden en
uitbijters uit te sluiten.
SUMMARY
The goal of this experiment is to calculate the pH optimum and to determine the enzyme
activity of bacterial α-amylase, at different substrate concentrations and to determine the
Michaelis-Menten parameters km and Vmax.
This is analysed through UV-VIS. In this experiment, different solutions and concentrations
have been made. Based on the measured absorbance from a UV-VIS analysis, a Michaelis-
Menten plot and a lineweaver Burk plot can be made. Both methods are used for the
analysis of this experiment.
Day one, figure 2, shows that the pH optimum is at a pH of 6. In the second part of this
experiment, the absorbances of the enzyme activity were measured after 3 minutes. This
resulted in the values for Vmax and km. The values are: Km 10,6 mM and Vmax 0,055
ΔA/min according to the Michaelis-Menten plot.
Looking at the lineweaver Burk plot, the km and Vmax can be approximated more accurately.
This shows that the km is -174,89 mM, and the Vmax is -0,3211 mM/s.
However, these are implausible values that do not meet the expectations. Therefore, this
study is considered to be unreliable. It is recommended to continue this study and to perform
the measurements in triplicate in order to rule out any improbabilities and outliers.
PRINCIPE
2
Les avantages d'acheter des résumés chez Stuvia:
Qualité garantie par les avis des clients
Les clients de Stuvia ont évalués plus de 700 000 résumés. C'est comme ça que vous savez que vous achetez les meilleurs documents.
L’achat facile et rapide
Vous pouvez payer rapidement avec iDeal, carte de crédit ou Stuvia-crédit pour les résumés. Il n'y a pas d'adhésion nécessaire.
Focus sur l’essentiel
Vos camarades écrivent eux-mêmes les notes d’étude, c’est pourquoi les documents sont toujours fiables et à jour. Cela garantit que vous arrivez rapidement au coeur du matériel.
Foire aux questions
Qu'est-ce que j'obtiens en achetant ce document ?
Vous obtenez un PDF, disponible immédiatement après votre achat. Le document acheté est accessible à tout moment, n'importe où et indéfiniment via votre profil.
Garantie de remboursement : comment ça marche ?
Notre garantie de satisfaction garantit que vous trouverez toujours un document d'étude qui vous convient. Vous remplissez un formulaire et notre équipe du service client s'occupe du reste.
Auprès de qui est-ce que j'achète ce résumé ?
Stuvia est une place de marché. Alors, vous n'achetez donc pas ce document chez nous, mais auprès du vendeur ReneeTessa. Stuvia facilite les paiements au vendeur.
Est-ce que j'aurai un abonnement?
Non, vous n'achetez ce résumé que pour €3,49. Vous n'êtes lié à rien après votre achat.
