Resume
samenvatting theorie obv inleidingsles
- Établissement
- Universiteit Antwerpen (UA)
Samenvatting gemaakt op basis van de inleidingsles aangevuld met de informatie in de practicumhandleiding
[Montrer plus]
Vendeur
S'abonnerAperçu du contenu
Geïntegreerd practicum Biochemie theorieSDH
Ijklijn en calibratie
Kalibratie: aan de hand van een ijklijn
Ijklinn wordt gemaakt door een verdunningsreeks: vertrekken van gekende C verdunningen
Op elke verdunnig wordt de enzym assay toegepast en zo kunnnen we een verband maken
X-as: concentratie , y-as : meting
Normaal gezien krijg je in het practicum een lineair verband regressie
Verdunningsreeks van TTC
Na dithioniet: gaat alle TTC omvormen naar de rode kleur zonder dat er een enzymatische reactie is.
Aceton toevoegen zodat het rood weer in oplossing komt (organisch solvent)
Interpolatie: afleiden van nieuwe datapunten binnen het bereik van gekende datapunten onder aanname van
een zekere relatie tussen die punten
Extrapolatie: “ “ buiten het bereik van gekende datapunten (het verlengen van de rechte)
! altijd eerst corrigeren mbv blanco meting want er zijn in een cel altijd aspecifieke omvormingen van TTC die
niets te maken hebben met SDH
Blanco door substraat hierdoor werkt SDH niet
Ook compensatie nodig voor de verschillende concentraties van organel per ml
TCA: is een zeer sterk zuur en gaat alles protoneren en doen neerslaan zo vinden we het drooggewicht
hoeveel TTC/ gram / tijd
OD : optische dichtheid van een golflengte = maat voor absorptie
1. Waarom aceton toevoegen bij de SDH assay?
Aceton zal de neerslag in de proefbuis oplossen waardoor we de OD-bepaling kunnen uitvoeren.
2. Waarom is het belangrijk het drooggewicht te bepalen?
Zodat we het aantal g weefsel per ml weefselfractie kunnen bepalen.
Celfractionatie
Doel: cellen openbreken maar organellen intact houden
Hoe? : homogenaat in buffer (isotone buffer dus cellen breken niet)
Potter homogenisatie:
- Glazen buis met een teflonstamper
- Past er net in
- Er is nog een kleine ruimte tussen
- Stamper laten draaien
- Door op en neer te bewegen gaan de cellen openbreken door de druk
- Organellen breken niet want die zijn veel kleiner
- Milde manier van homogeniseren
!! wanneer je een cel openbreekt komt volledige inhoud vrij, ook proteasen, deze enzymes gaan bepaalde
andere eiwitten afbreken. Door koeling worden deze geïnhibeerd daarom steeds op ijs werken.
, 3. Waarom gebeurt de weefselfractionatie bij 0 graden in ijs?
Inhiberen van de enzymen en proteases.
Differentiële centrifugatie
- Door G-kracht
- Hoe zwaarder hoe minder G-kracht er nodig is om het
deeltje te doen neerslagen
- Hoe meer toeren, hoe meer G-kracht
Om verder te centrifugeren moet je speciale centrifuges in vacuum
hebben
!! dit is geen 100% scheiding maar wel 90% aanrijking ong
In totaal 4 fracties
SDH Assay
SDH: Succinaat dehydrogenase is een enzym in de mitochondriën die succinaat omzet naar fumaraat en hierbij
TTC T-phenyl tetrazonium chloride (kleurloos) omzet naar Formazan T-phenyl formazan (rood).
Door de kleuromslag kan je de enzymactiviteit bepalen
Doel van het experiment: aantonen dat de citroenzuurcyclus zich afbeeld in de mitochondriën
Cel opsplitsen in verschillende fracties
4. Waarom Na dithioniet toevoegen bij de SDH-assay?
Na dithioniet reduceert TTC waardoor we een ijklijn kunnen opstellen.
5. Wat is de kleuromzetting bij colourometrische kleuring?
Kleurloos TTC zal worden gereduceerd tot een rood wateronoplosbaar Formazan.
LDH isolatie
Wat is LDH? Dit is een isoenzym dat zorgt voor de anaerobe omzetting van pyruvaat naar lactaat en anderom.
Het heeft 5 isovormen. In dit experiment proberen we enkel LDH 5 te isoleren. LDH 5 komt voor in de spieren
en heeft M4 subeenheden. Elke isovorm heeft zijn eigen isoelektrisch punt. Bij LDH 5 is dit 8.44 .
Isoelektrisch punt is de pH waar het aantal + ladingen gelijk is aan het aantal – ladingen dus netto is de lading 0
6. Isoelektrisch punt; wat bindt bij een bepaalde pH?
Bij het isoelektrisch punt is de netto lading van het eiwit 0. Wanneer de pH lager is dan het pI van het eiwit;
netto positieve lading, pH hoger dan het pI van het eiwit, netto negatieve lading.
Zoutprecipitatie
Wat? Eiwitten scheiden op basis van oplosbaarheid
Hoe hoger de zoutconcentratie, hoe lager de oplosbaarheid en dus hoe meer neerslag
- Competitie om de watermantel
- Hoe sterker de mantel gebonden rond het eiwit hoe sneller ze neerslagen
- We gebruiken ammonium sulfaat want dat is een sterk zout
- Wat overblijft in het supernatans zijn eiwitten die niet neerslagen na een (NH 4)2SO4 concentratie van
65%
Les avantages d'acheter des résumés chez Stuvia:
Qualité garantie par les avis des clients
Les clients de Stuvia ont évalués plus de 700 000 résumés. C'est comme ça que vous savez que vous achetez les meilleurs documents.
L’achat facile et rapide
Vous pouvez payer rapidement avec iDeal, carte de crédit ou Stuvia-crédit pour les résumés. Il n'y a pas d'adhésion nécessaire.
Focus sur l’essentiel
Vos camarades écrivent eux-mêmes les notes d’étude, c’est pourquoi les documents sont toujours fiables et à jour. Cela garantit que vous arrivez rapidement au coeur du matériel.
Foire aux questions
Qu'est-ce que j'obtiens en achetant ce document ?
Vous obtenez un PDF, disponible immédiatement après votre achat. Le document acheté est accessible à tout moment, n'importe où et indéfiniment via votre profil.
Garantie de remboursement : comment ça marche ?
Notre garantie de satisfaction garantit que vous trouverez toujours un document d'étude qui vous convient. Vous remplissez un formulaire et notre équipe du service client s'occupe du reste.
Auprès de qui est-ce que j'achète ce résumé ?
Stuvia est une place de marché. Alors, vous n'achetez donc pas ce document chez nous, mais auprès du vendeur pakitavanpuyenbroeck. Stuvia facilite les paiements au vendeur.
Est-ce que j'aurai un abonnement?
Non, vous n'achetez ce résumé que pour €2,99. Vous n'êtes lié à rien après votre achat.
Peut-on faire confiance à Stuvia ?
4.6 étoiles sur Google & Trustpilot (+1000 avis)
79202 résumés ont été vendus ces 30 derniers jours
Fondée en 2010, la référence pour acheter des résumés depuis déjà 14 ans