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Samenvatting Te kennen voor theorie examen geïntegreerd practicum biochemie

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[Behaald resultaat: 15] Een volledige, nette en goedkope samenvatting van alle theorie die je moet kennen voor het geïntegreerd practicum biochemie van het tweede semester van het tweede jaar biomedische wetenschappen. Uitgelegd per experiment, met de belangrijkste trefwoorden in het vet aangeduid...

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  • Inconnu
  • 8 décembre 2019
  • 4
  • 2018/2019
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Par: katrienvanheusden • 3 année de cela

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Par: 24 • 4 année de cela

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Hanne1999
Experiment 1:
 Succinaat dehydrogenase SDH komt voor in de mitochondria (binnenste membraan)
 Succinaat is het substraat
 SDH wordt bepaald door kwantitatieve reductie van kleurloos tetrazoliumzout TTC
tot rood wateronoplosbaar formazan. (omzetting waarneembaar bij 480nm)
 Natrium dithioniet zorgt voor reductie van TTC tot formazan bij de SDH-assay, zodat
er een ijklijn opgesteld kan worden.
 Aceton wordt toegevoegd omdat het ervoor zorgt dat de formazan-neerslag oplost
=> OD-bepaling mogelijk
 Cellen in sucroseoplossing brengen, want in water zouden de cellen barsten door
osmose
 Weefselfractionaties op ijs bijhouden om proteases te inhiberen
 Centrifugatie: hoe hoger g, hoe kleiner de deeltjes die neerslaan
 Potter-Elvejhem homogenisator: met een stamper worden de cellen gebroken m.b.v.
druk, maar de organellen blijven wel intact => dus om organellen uit de cellen te
halen
 Blanco geeft de SDH-assay zonder substraat, zodat het achtergrondgeruis gemeten
kan worden.
 Drooggewicht wordt bepaald voor het berekenen van het aantal gram weefsel per ml
weefselfractie, voor het berekenen van de extinctiecoëfficient, en voor het
controleren van de juistheid van de colorische methode.


Experiment 2:
 Lactaat dehydrogenase (LDH) komt vooral voor in hart, lever, RBC, nier, spier, longen
en hersenen
 LDH heeft 5 isoenzymes, LDH-5 zit in lever en spier
 LDH 1-4 = negatief, LDH5 = positief
 Iso-elektrisch punt van LDH spier: pI = 8,44 & LDH hart: pI = 5,71 (gegeven op test)
 TE buffer zorgt ervoor dat DNA en RNA oplosbaar worden, zonder dat ze worden
afgebroken.
 Testen van de zuiverheid wordt gedaan door eiwit- en enzym assay’s en door het
uitvoeren van SDS page, western blot en natieve elektroforetische isoenzyme-
scheiding.

 Ammoniumprecipitatie dient om de eiwitten te scheiden op basis van oplosbaarheid
in stijgende AS concentratie: hoe hoger de zoutconcentratie => hoe lager de
oplosbaarheid => verklaring: het AS zout zal in competitie treden met de eiwitten
voor het binden aan de aanwezige watermoleculen om zo een watermantel te
vormen. Als de zouten reeds de watermoleculen in beslag nemen, zullen de eiwitten
geen watermantel kunnen vormen en zullen ze dus samenklitten => neerslag.

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