Resume
Samenvatting Biomoleculen
- Établissement
- Universiteit Gent (UGent)
Samenvatting Biomoleculen
[Montrer plus]
Aperçu du contenu
2022-2023 Biomoleculen: analyse en scheiding Amelia HajnusBiomoleculen: analyse en scheiding
Deel 1: Proteïne-opzuivering
Wat zijn proteïnen ?
Belangrijke aminozuren:
pH < pKa: zijketen geprotoneerd
pH = pKa: helft geprotoneerd, helft gedeprotoneerd
pH > pKa: zijketen gedeprotoneerd
Primaire structuur eiwit: AZ sequentie
Secundaire structuur eiwit: α-helix en β-vouwblad
H-bruggen
Tertiaire structuur eiwit: disulfidebinding, ionische binding, H-bruggen, hydrofobe interacties
Quaternaire structuur eiwit: verschillende peptiden interageren
dimeren, trimeren, tetrameren,…
Posttranslationele modificaties: toevoeging nieuwe functionele groepen
Iso-elektrisch punt (IEP of pI): pH waarbij het proteïne geen netto positieve of negatieve lading heeft
2D-polyacrylamidegelelektroforese
Scheiding op basis van moleculair gewicht en pI
Hydrofobiciteit vs. Hydrofiliciteit: hydrofobe eiwitten aan binnenkant → membranen
1
,2022-2023 Biomoleculen: analyse en scheiding Amelia Hajnus
Absorptie door een eiwit
Absorberen licht bij 280 nm: tyrosine, tryptofaan en disulfidebruggen
! phenylalanine niet
Totale absorptie hangt af van extinctiecoëfficiënt ε [1/M cm]: wordt groter naarmate meer trp/tyr/S-S
Wet van Lambert-Beer: A = C * ε * L
C: concentratie [M]
L: lengte cuvet [cm]
Proteïne-opzuiveringstechnieken
Oplosbaarheid
Balans geladen, polaire en hydrofobe AZ aan oppervlak eiwit bepaalt oplosbaarheid
In neutrale zoutoplossing of organische solventen: proteïnen precipiteren/neerslaan in een bepaald bereik door
een lage oplosbaarheid
Ruwe manier op te fractioneren in ‘oplosbaarheidsfracties’
Zuiver proteïne verkrijgen onmogelijk doordat de oplosbaarheidsbereiken overlappen
Ammoniumsulfaatprecipitatie
= salting out
Proteïne in bufferoplossing is zeer sterk gehydrateerd: geladen groepen aan oppervlak trekken watermoleculen
aan en binden ze sterk
Toevoeging veel zout: zoutionen trekken watermoleculen weg van proteïne-oppervlakte (doordat ionen een
hogere ladingsdensiteit hebben) proteïne-moleculen gedwongen met elkaar te interageren + aggregeren
Elk proteïne begint te precipiteren vanaf bepaalde zoutconcentratie zonder dat hij denatureert
Pellet: precipitaten collecteren via centrifuge
Supernatans: bevat oplosbare deel
Doel: proteïne-mengsels fractioneren of concentreren
2
, 2022-2023 Biomoleculen: analyse en scheiding Amelia Hajnus
Lading
Verschillende oppervlakteladingen (afkomstig van glu, asp, his, lys, arg) die pH afhankelijk zijn → pI proteïne
Ionuitwisselaars
Ionenuitwisselaars: scheiden negatief geladen (anionen) en positief geladen (kationen) proteïnen volgens
gradiënt
Anionuitwisselaar Kationuitwisselaar
+ geladen hars/resin - geladen hard/resin
Bindt anionen Bindt kationen
Doorloop kationen Doorloop anionen
Elueren = gebonden ionen losmaken d.m.v. zoutoplossing
Eluaat = wat vrijkomt na stijging zoutconcnetratie
NaCl heeft grotere ladingsdensiteit → verdringt gebonden eiwitten → minst sterk gebonden eiwitten elueren
eerst bij laagste c(NaCl)
Elueren kan ook d.m.v. pH-gradiënt
Soorten:
1) Beads in oplossing: discontinue metingen met spectrofotometer
2) Zelf-bereide kolom startende van een slurry: discontinue metingen met spectrofotometer
3) Prepacked kolom: real-time monitoring
4) Chromatografiesystemen
Gradiënt elutie
Chromatogram:
x-as: volume dat over uitwisselaar is gelopen uitgedrukt in kolomvolumes
y-as: blauw = absorptie bij 280 nm als maat voor eiwitten die de kolom passeren
rood = c(NaCl) waarmee geëlueerd wordt
3
Les avantages d'acheter des résumés chez Stuvia:
Qualité garantie par les avis des clients
Les clients de Stuvia ont évalués plus de 700 000 résumés. C'est comme ça que vous savez que vous achetez les meilleurs documents.
L’achat facile et rapide
Vous pouvez payer rapidement avec iDeal, carte de crédit ou Stuvia-crédit pour les résumés. Il n'y a pas d'adhésion nécessaire.
Focus sur l’essentiel
Vos camarades écrivent eux-mêmes les notes d’étude, c’est pourquoi les documents sont toujours fiables et à jour. Cela garantit que vous arrivez rapidement au coeur du matériel.
Foire aux questions
Qu'est-ce que j'obtiens en achetant ce document ?
Vous obtenez un PDF, disponible immédiatement après votre achat. Le document acheté est accessible à tout moment, n'importe où et indéfiniment via votre profil.
Garantie de remboursement : comment ça marche ?
Notre garantie de satisfaction garantit que vous trouverez toujours un document d'étude qui vous convient. Vous remplissez un formulaire et notre équipe du service client s'occupe du reste.
Auprès de qui est-ce que j'achète ce résumé ?
Stuvia est une place de marché. Alors, vous n'achetez donc pas ce document chez nous, mais auprès du vendeur BrentUGent. Stuvia facilite les paiements au vendeur.
Est-ce que j'aurai un abonnement?
Non, vous n'achetez ce résumé que pour €2,99. Vous n'êtes lié à rien après votre achat.
Peut-on faire confiance à Stuvia ?
4.6 étoiles sur Google & Trustpilot (+1000 avis)
73314 résumés ont été vendus ces 30 derniers jours
Fondée en 2010, la référence pour acheter des résumés depuis déjà 14 ans