Resume
Samenvatting Praktijk course 5 blok 1
- Cours
- Établissement
Samenvatting en uitleg over de praktijk van course 5 blok 1
[Montrer plus]
Vendeur
S'abonner
noramfaro
Aperçu du contenu
Praktijk Course 5 blok 1Nora Faro
BML2D
2023
1
,Inhoudsopgave
Inhoudsopgave....................................................................................................................... 2
Inleiding.................................................................................................................................. 3
Vector en mutatie................................................................................................................... 3
Standaard PCR...................................................................................................................... 5
PCR zuivering........................................................................................................................ 9
DNA concentratie en zuiverheid...........................................................................................10
Plasmide isolatie................................................................................................................... 11
Gel zuivering........................................................................................................................ 12
Restrictie enzym digestie......................................................................................................13
Ligatie................................................................................................................................... 15
Transformatie in E. coli TOP10 cellen..................................................................................15
Kolonie PCR......................................................................................................................... 17
Transformatie in BL21 (DE3) cellen......................................................................................18
2
, Inleiding
In course 5 wordt het effect van een mutatie in het gen dat codeert voor het enzym isocitraat
dehydrogenase-1 (IDH1) op de enzymatische functie onderzocht. Dit enzym is onderdeel
van de citroenzuurcyclus; de metabolische route van aerobe organismen waarbij er door
oxidatie van kleine organische moleculen energie ontstaat, in de vorm van ATP, NADH en
FAD. De restproducten van deze cyclus zijn CO2 en H2O. IDH1 is het enzym dat zorgt voor
de omzetting van isocitraat in 𝝰-ketoglutaraat. Hierbij ontstaat NADH. Mutaties in het gen
dat codeert voor IDH1 zijn oncogeen, en zorgen onder andere voor het ontstaan van
glioblastoma. Dit zijn agressieve hersentumoren. In de praktijk van course 5 wordt er
gewerkt met drie verschillende mutaties en vectoren. Het gen bestaat uit cDNA, dit is DNA
dat door reverse transcriptase is afgeschreven van mRNA. Hierdoor bevat het geen
intronen. Het IDH1 insert wordt in de vector geplaatst. De host cel zal veel kopieën gaan
maken van de plasmide, waardoor er een grotere hoeveelheid van het gen ontstaat
Vector en mutatie
pGEX-4T1
- Tac promotor: promotor gemaakt uit combinatie van trp, en lac.
- 4969 bp.
- GST tag: glutathione S-transferase (26 kDa), sequentie die expressievectoren vaak
bevatten. De GST tag bindt aan de N-terminus van het (fusie)eiwit. GST zorgt ervoor
dat het eiwit direct na translatie in een stabiele, oplosbare vorm vouwt. Hierdoor is de
yield van eiwitexpressie hoger.
- Ampicilline resistentie: Door het amp gen is de plasmide resistent tegen ampicilline.
- IPTG inducer: IPTG is een voorloper molecuul van allolactose, dit is het inducer
molecuul van het lac-operon. Doordat de tac-promotor deels lac is, is het
induceerbaar door IPTG.
pBad/His
- araBAD promotor: onderdeel van het arabinose operon.
- 4103 bp.
3
Les avantages d'acheter des résumés chez Stuvia:
Qualité garantie par les avis des clients
Les clients de Stuvia ont évalués plus de 700 000 résumés. C'est comme ça que vous savez que vous achetez les meilleurs documents.
L’achat facile et rapide
Vous pouvez payer rapidement avec iDeal, carte de crédit ou Stuvia-crédit pour les résumés. Il n'y a pas d'adhésion nécessaire.
Focus sur l’essentiel
Vos camarades écrivent eux-mêmes les notes d’étude, c’est pourquoi les documents sont toujours fiables et à jour. Cela garantit que vous arrivez rapidement au coeur du matériel.
Foire aux questions
Qu'est-ce que j'obtiens en achetant ce document ?
Vous obtenez un PDF, disponible immédiatement après votre achat. Le document acheté est accessible à tout moment, n'importe où et indéfiniment via votre profil.
Garantie de remboursement : comment ça marche ?
Notre garantie de satisfaction garantit que vous trouverez toujours un document d'étude qui vous convient. Vous remplissez un formulaire et notre équipe du service client s'occupe du reste.
Auprès de qui est-ce que j'achète ce résumé ?
Stuvia est une place de marché. Alors, vous n'achetez donc pas ce document chez nous, mais auprès du vendeur noramfaro. Stuvia facilite les paiements au vendeur.
Est-ce que j'aurai un abonnement?
Non, vous n'achetez ce résumé que pour €6,49. Vous n'êtes lié à rien après votre achat.
Peut-on faire confiance à Stuvia ?
4.6 étoiles sur Google & Trustpilot (+1000 avis)
73314 résumés ont été vendus ces 30 derniers jours
Fondée en 2010, la référence pour acheter des résumés depuis déjà 14 ans