Celbiologie WPO examen
WPO 1 – Inleiding + lichtmicroscoop
Lichtmicroscoop
Köhler belichting
1. Lichtschakelaar aanzetten
2. Preparaat in de houder plaatsen & lokaliseren van het weefsel (5x)
3. Scherpstellen beeld
4. Velddiafragma bijna dichtdraaien
5. Condensor en focus samen scherpstellen
6. Centreren van de diafragma-lichtvlek
7. Velddiafragma opendraaien tot veld juist belicht is
8. Contrast regelen met het apertuurdiafragma
9. Bij hogere vergroting – stappen herhalen
Vervaardigen van preparaten
Waarom? Weefsel is weinig doorlatend en heeft weinig contrast
Doel: cellen & weefsel observeerbaar maken voor LM/EM
Methode
1. Fixen van het weefsel
Doel:
Weefsel vastleggen in de in vivo toestand →behoud oorspronkelijke
structuur
Beschermen van weefsel tegen autolyse, anoxie en microbiele
aantasting
Methodes
- Fysiche fixatie (vloeibare stikstof)
- Chemische fixatie (formaldehyde, osmiumtetroxyde, …)
o Immersie = onderdompelen
o Perfusie = van binnenuit
2. Inbedden
In inbedmiddel (bv. Parafine) – weefsel wordt hard
3. Snijden in plakjes
- Door middel van een microtoom of
Vriesmicrotoom: voor vriescoupes waarbij weefsel zelf niet
ontdooit -> snel maken
Nadeel: delen van weefsel gaan kapot en morfologie is slechter
- Manier van snijden hangt af van het weefsel en geeft een ander
beeld
4. Kleuren / contrasteren
- Kleurstoffen
- Antilichamen
Vriescoupes maken →belangrijk in de pathologie
Celbiologie – WPO examen
2
, Paraffine- / eponcoupes maken →belangrijk in de histologie:
Chemische fixatie door immersie of perfusie → dehydratatie weefsel (70-90-100%
alcohol)
→ alcohol = oplosmiddel voor inbedmiddel
→ inbedden in: paraffine of metacrylaat (LMS)/ epon of metacrylaat (EMS)
→ uitharden inbedmiddel: paraffine → T↓; epon → T↑ → coupes snijden
→ coupes depraraffineren en rehydrateren → coupes kleuren →coupes
dehydrateren, klaren en monteren
Preparaten van celsuspensies
- Maken van een uitstrijkje (vb. voor bloedcellen)
- Bloed volledig uitstrijken en onder microscoop bekijken
- Cytospintechniek (vb. witte bloedcellen) => let op morfologie wordt
aangetast
- Vervaardigen van een celpellet (verwerken als weefsel)
➔ Door niet te centrifugeren gaan alle celsuspensies naar beneden zakken
en de celpelletn vormen.
Toepassingen van de microscoop
Histologie
=bestuderen van weefsels
- Normale weefsels en pathologie
- Gebruik van kleuringen
- Bv. Lever
(centraal bloedvat is omringd door membraan en sinusoïde (groeve
gemaakt door hepatocyten) niet)
Celkweek
- Cellen worden gekweekt door experimenten
- Deze cellen zijn kleurloos (met kleurstoffen gaan ze dood) ->
fasecontrastmicroscoop
- Volgt de groei van cellen
Digitale beeldacquisitie
Digitale camera gekoppeld aan PC capteert beelden
Image analyse software laat toe om metingen uit te voeren:
- Telleningen van levende/dode cellen
- Bepaling van de zuiverheid
- Meten van oppervlak
Verschillende configuraties bestaan:
- Live cell imaging
= incubator om preparaattafel (live celkweek volgen)
- 3D imaging
= module in software
- Video microscopie
= Time-lapse module + motorized stage
Gevaar: fout conclusies trekken door andere beelden (fotoshop)
Celbiologie – WPO examen
2
Les avantages d'acheter des résumés chez Stuvia:
Qualité garantie par les avis des clients
Les clients de Stuvia ont évalués plus de 700 000 résumés. C'est comme ça que vous savez que vous achetez les meilleurs documents.
L’achat facile et rapide
Vous pouvez payer rapidement avec iDeal, carte de crédit ou Stuvia-crédit pour les résumés. Il n'y a pas d'adhésion nécessaire.
Focus sur l’essentiel
Vos camarades écrivent eux-mêmes les notes d’étude, c’est pourquoi les documents sont toujours fiables et à jour. Cela garantit que vous arrivez rapidement au coeur du matériel.
Foire aux questions
Qu'est-ce que j'obtiens en achetant ce document ?
Vous obtenez un PDF, disponible immédiatement après votre achat. Le document acheté est accessible à tout moment, n'importe où et indéfiniment via votre profil.
Garantie de remboursement : comment ça marche ?
Notre garantie de satisfaction garantit que vous trouverez toujours un document d'étude qui vous convient. Vous remplissez un formulaire et notre équipe du service client s'occupe du reste.
Auprès de qui est-ce que j'achète ce résumé ?
Stuvia est une place de marché. Alors, vous n'achetez donc pas ce document chez nous, mais auprès du vendeur louccaloucca. Stuvia facilite les paiements au vendeur.
Est-ce que j'aurai un abonnement?
Non, vous n'achetez ce résumé que pour €5,49. Vous n'êtes lié à rien après votre achat.