Volledige samenvatting van het vak 'Farmaceutische biotechnologie' gedoceerd door prof. Martinet. De samenvatting telt 70 pagina's en bevat alle info van de slides en lessen. Ook de figuren/mechanismen die hij tijdens de les op het bord tekent, zijn elektronisch uitgetekend in het document!
Nikita Cassimon 3e bachelor farmaceutische wetenschappen s0184207
Farmaceutische biotechnologie
Biotechnologie = Het gebruik en manipulatie van biologische systemen (micro-organismen,
plantaardig, dierlijk) ter (industriële) bereiding van natuurlijke grondstoffen en biomassa die van
belang zijn voor de mens
! Geen agricultuur en veeteelt
1850 19e eeuw Heden
Tijdperk 1 Tijdperk 2 Tijdperk 3 Tijdperk 4
Onbewust gebruik van bacteriën en Introductie industriële processen Kennis van aseptische Invoer van recombinant DNA
gisten om grote hoeveelheden glycol, technieken → zuivere culturen technieken en de definitieve
butanol, aceton en citroenzuur → farmaceutische productie doorbraak van plantaardige en
Productie levensmiddelen: bier, wijn, aan te maken zonder penicillines dierlijke celculturen in
kaas, yoghurt en azijn contaminatie productieprocessen
L.. Pasteur ontdekt dat micro-
organismen verantwoordelijk zijn voor
omzettingsreacties
Contaminaties aanwezig
! Biotechnologie is veel meer dan enkel de DNA manipulaties, alhoewel beide begrippen vaak
verkeerdelijk als synoniemen gebruikt worden
Biotechgeneesmiddelen:
• Recombinante eiwitten:
= (menselijke) eiwitten die aangemaakt worden
door genetisch gewijzigde organismen
Bv. Insuline uit GG bacteriën
• Therapeutische antilichamen
20% van huidige geneesmiddelen
50% van de geneesmiddelen in ontwikkeling
Fermentatie = productie van biomassa door micro-organismen
Kweek in reactietank (fermentor):
Meestal gebruik van een minimaal voedingsmilieu:
• C-bron (bv. glucose) → ATP
• N-bron (bv. ammonium) → aminozuren
• Zouten en spoorelementen
Minimaal: rijker medium laat veel sneller celgroei toe + zo goedkoop mogelijk
+ kan snel gezuiverd worden
,Nikita Cassimon 3e bachelor farmaceutische wetenschappen s0184207
Fermentatieprocessen:
Batch proces Continue proces Continue proces met
celrecyclering
• Fermentatie tot • Voortdurend • Continue proces
gewenst punt bereikt nutriënten toegevoegd • Recyclering van
is bv. densiteit en reactiemengsel verwijderde micro-
• Inhoud van tank (organismen + organismen
verwijderd en product) afgetapt
eindproduct geïsoleerd
Voordeel: sneller hogere celdensiteit want geen verlies aan
materiaal, nuttig voor traag opkweekbare organismen
Gebruikte micro-organismen: GRAS (Generally Recognised As Safe)
• Bacteriën bv. Bacillus, Streptomyces Niet toxisch
• Schimmels bv. Aspergillus, Penicillinum Niet pathogeen
• Gisten bv. Saccharomyces cerevisiae Produceren meestal geen AB
Eindproducten: enzymen, polysachariden, aminozuren, etc.
Nucleotiden:
• Pentose
• Stikstofhoudende heterocyclische base
• Fosfaatgroep
Primaire DNA structuur Secundaire DNA structuur
• Polynucleotide-structuur = Watson-Crick model
• Vorming van 3’-5’-fosfordiëster binding • 2 anti-parallelle ketens
• Suiker fosfaatskelet waarop de basen • Dubbelstrengig
gebonden zijn via de koolstof 1’ van de • Beiden ketens samengehouden door H-
suikermolecule bruggen tussen complementaire basen
Structuur DNA:
• Baseparen liggen in 1 vlak loodrecht op de lengterichting
• Stabiliteit door Van der Waals krachten en hydrofoob effect
• DNA heeft een rechtsdraaiende dubbel helix structuur
,Nikita Cassimon 3e bachelor farmaceutische wetenschappen s0184207
Transcriptie = omzetting van DNA in boodschapper RNA (messenger RNA, mRNA)
• Zeer selectief: in zoogdieren slechts 1% DNA omgezet in RNA
• RNA polymerase enzym: bindt promotor + synthetiseert RNA streng van 5’ naar 3’ richting
tot stopsignaal
3 RNA polymerasen in eukaryoten
RNA polymerase I RNA polymerase II RNA polymerase III
(aanmaak ribosomale RNAs) (schrijft genen over die vertaald (aantal kleine stabiele RNAs
worden in proteïnen) aan waaronder tRNA)
• mRNAs worden gemodificeerd aan 5’ en 3’: onderscheiden van de RNAs gemaakt door
andere polymerasen + aangeven omzetting in proteïnen
5’-Capping Polyadenylatie 3’ einde
• Toevoeging van een gemethyleerd G • Herkenning van een polyadenylatiesignaal
nucleotide aan 5’ eind (AAUAAA) in het transcript door specifieke
• Dit is een 5’-5’ binding (men gaat ervanuit RNA-bindende eiwitten
dat een deel van de nodige enzymen • Stop transcriptie
gebonden zit op het polymerase II) • Klieving transcript door endonuclease
• Belangrijke rol bij eiwitsynthese en zou RNA • Poly A polymerase voegt een staart van
beschermen tegen degradatie ~250 A’s toe aan het 3’ einde
Polymerase schuift over DNA en maakt RNA tot er een
polyadenylatiestructuur wordt overgeschreven
Gaan binden en transcriptie stopt
RNA keten wordt gekliefd en lange keten van A
nucleotiden hecht aan (poly A tails) = bescherming tegen
degradatie
Interons worden weggespliced voordat RNA als template
kan dienen
, Nikita Cassimon 3e bachelor farmaceutische wetenschappen s0184207
• Proteinase K • Proteinase K
(50°C ; 30 minuten) (50°C ; 30 minuten) • Proteinase K
(50°C ; 30 minuten)
3. Binding DNA op een matrix met positief 3. Binding DNA op silica in hoog zout:
geladen diethyl aminoethyl [DEAE] groepen: • Een chaotroop zout zal de watermantel
rond silica verstoren
• Na+ ionen vormen een zoutbrug tussen
de negatief geladen silica en de
fosfaatgroepen op DNA
4. Was van DEAE-matrix met medium-zout
concentraties (0,75-1 M NaCl): want bij lage C
enkel nucleotiden weggewassen maar geen
volwaardig DNA
5. Elutie DNA van DEAE in hoog zout (>1,25 M
NaCl): losmaken van matrix
6. Precipitatie DNA met isopropanol (voor
precipitatie: alcohol + zout)
4. Elutie in lage zoutconcentraties:
• Rehydratatie van de silica matrix
• Verbreekt de binding met DNA
Eigenschappen van silicamembranen:
• Silica (siliciumdioxide) gebaseerd materiaal
• Selectieve adsorptie van DNA
• DNA binding onder hoge zoutconcentraties
• DNA elutie onder lage zoutconcentraties
• Geen organische of toxische reagentia
• Geen alcohol precipitatie (want geen overtollig zout op het einde)
RNA-isolatie:
Methode 1: extractie met organische Methode 2: solid-phase extractie met silica
solventen
1. Zure fenol/chloroform/isoamylalcohol 1. Isolatie cellen of weefsel
toevoegen aan cellysaat (controleer pH) 2. Lyse van cellen in een lyse-oplossing
2. Emulsie maken door vortexen (met guanidine thiocyanaat) →
3. Centrifugeer → 3 fases inactivatie RNases
4. Neem waterige fase en precipiteer RNA 3. Binding RNA op silica matrix (hoog zout)
met isopropanol 4. Wassen gebonden RNA
5. Elutie RNA van silica (laag zout)
Les avantages d'acheter des résumés chez Stuvia:
Qualité garantie par les avis des clients
Les clients de Stuvia ont évalués plus de 700 000 résumés. C'est comme ça que vous savez que vous achetez les meilleurs documents.
L’achat facile et rapide
Vous pouvez payer rapidement avec iDeal, carte de crédit ou Stuvia-crédit pour les résumés. Il n'y a pas d'adhésion nécessaire.
Focus sur l’essentiel
Vos camarades écrivent eux-mêmes les notes d’étude, c’est pourquoi les documents sont toujours fiables et à jour. Cela garantit que vous arrivez rapidement au coeur du matériel.
Foire aux questions
Qu'est-ce que j'obtiens en achetant ce document ?
Vous obtenez un PDF, disponible immédiatement après votre achat. Le document acheté est accessible à tout moment, n'importe où et indéfiniment via votre profil.
Garantie de remboursement : comment ça marche ?
Notre garantie de satisfaction garantit que vous trouverez toujours un document d'étude qui vous convient. Vous remplissez un formulaire et notre équipe du service client s'occupe du reste.
Auprès de qui est-ce que j'achète ce résumé ?
Stuvia est une place de marché. Alors, vous n'achetez donc pas ce document chez nous, mais auprès du vendeur nikitacassimon. Stuvia facilite les paiements au vendeur.
Est-ce que j'aurai un abonnement?
Non, vous n'achetez ce résumé que pour €10,49. Vous n'êtes lié à rien après votre achat.
