Resume
Samenvatting moleculaire biologie labotest
- Établissement
- Hogeschool Gent (HoGent)
Samenvatting van slides en verslagen moleculaire biologie
[Montrer plus]
Aperçu du contenu
Moleculaire biologie – labotestBioveiligheid en afspraken L2-labo
Gebruik handschoenen
Handschoenen AAN:
- Jezelf beschermen tegen: bloed, pathogenen, chemicaliën
- Je materiaal beschermen: steriel werken, Rnase-vrij werken, DNA contaminatie voorkomen
Handschoenen UIT:
- Je omgeving beschermen
o Na contact met bloed, pathogenen, chemicaliën
o Buiten het labo (1 handschoen bij transport)
o Voor contact met labo toestellen
o Voor contact met meubilair (kast, kraan, klink, …)
o Voor contact met persoonlijk materiaal (balpen, papier, GSM, …)
o Voor contact met huis (gezicht, handen, …)
o Bij beschadiging
In en uit L2-labo
Niet naar BINNEN:
- Voeding en drank
- Jassen en tassen
- Schrijfgerief
- Rekentoestel
- GSM
- Laptop
- Labomateriaal uit chemielabo’s
1
,Niet naar BUITEN:
- Balpennen en stiften
- Laptop lectoren
- Labojassen met bioveiligheidslabel
- Labomateriaal
Stappenplan epje openen
1. Controleer het label
2. Ontdooi volledig
3. Mengen/vortexen
4. Centrifugeren
5. Open het epje
Specifieke veiligheidsvoorschriften voor practicum moleculaire biologie
- Leg geen schriften en/of boeken op je laboratoriumtafel tijdens het uitvoeren van een
experiment
- Wees zuinig met reagentia
- Werken met eukaryote cellijnen, humane cellenen bloed: correct gebruik van de veiligheidskast
ter bescherming van het experiment en de onderzoeker
- Contaminatievoorkomen bij het uitvoeren van PCR
- Werken met Sybr Green (alternatief voor het meer toxische ethidiumbromide)
Werken met micropipet
- hang de pipetten zorgvuldig in het bijhorende rekje
- breng zorgvuldig een gepaste en zuivere tip aan op de pipettor
- respecteer de uiterste limieten van je pipet-stel het volume in van hoge naar lage stand
- duw de pipet in tot je de eerste weerstand voelt
- plaats de pipetpunt vertikaal en op de juiste diepte in de oplossing
- 1-2 mm voor P10, P20, P100 en P200
- 2-4 mm voor P1000
- 3-6 mm voor P5000
- zuig de oplossing zachtjes op (er mogen geen luchtbellen in zitten) en duw de vloeistof uit onder
een hoek van 20° tot 45° in het gewenste recipiënt
!! Syllabus lezen (in bijlage)
2
, Practicum 1: Humaan gDNA-isolatie en bepalen concentratie en zuiverheid DNA
Leerdoelen:
- HumaangDNA kunnen isoleren uit bloed of celpellet door middel van de silica-
membraantechnologie (kolomchromatografie)
- De kwantiteit en de kwaliteit van het geïsoleerde DNA door middel van spectrofotometrie
(Nanodrop) kunnen bepalen
- Bioveiligwerkenin eenL2-lab
- Correct met de micropipetlerenwerken
- Correct eenmicrocentrifuge kunnengebruiken
bepaling
PCR-amplificatie agarose
DNA-isolatie concentratie en
STR merker gelelektroforese
zuiverheid
Doel gDNA-isolatie
Zuiver DNA afzonderen uit bloed, speekselof uit een celpellet van cultuurcellen met de bedoeling in een
volgend practicum een PCR-analyse uit te voeren op het DNA.
Principe gDNA-isolatie
- Lyse van de cellen
- Verwijderen van contaminanten (proteïnen,...)
- Afzonderen van het DNA
gDNA-isolatie
Lyse van de cellen
- Cellen, weefsel in lysebuffer (≠ PBS: phosphatebuffersaline à zoutbuffer)
Verwijderen van
Celwand, contaminanten
celmembraan
- kapot maken
Verwijderen contaminanten
en van het Elueren van het
A aan de DNA van de
Adsorption = binden van het DNA
drager drager
aan de drager
Elution = elueren van het DNA
van de drager
3
, bepaling
PCR-amplificatie agarose
DNA-isolatie concentratie en
STR merker gelelektroforese
zuiverheid
gDNA-isolatie
Bepalen van de concentratie en zuiverheid van DNA/RNA
Bepalen van de concentratie en zuiverheid van
Spectrofotometer
gDNA-isolatie het DNA/RNA
λ = 260 nm à Bij deze golflengte absorberen de dubbele bindingen van purine en pyrimidine
A =• 1 ➔
Spectrofotometer
c = 50 µg/ml DNA
Bepalen van de concentratie en zuiverheid van
➔ c = 40 µg/ml RNA
het DNA/RNA λ = 260 nm
Bij deze golflengte absorberen de
• Spectrofotometer dubbele bindingen van purine en
pyrimidine
A = 1 ➔ c = 50 µg/ml DNA
→ c = 40 µg/ml RNA
λ = 260 nm
Kwaliteitscontrole DNA
Bij deze golflengte absorberen de
Toestellen VESA: dubbele bindingen van purine en
NA - Nanodrop 2000: concentratie, zuiverheid pyrimidine
ole DNA A = 1 ➔ c = 50 µg/ml DNA
→ c = 40 µg/ml RNA
SA
0
zer - Agilent 2100 bio-analyzer: concentratie
o-analyzer
4
Les avantages d'acheter des résumés chez Stuvia:
Qualité garantie par les avis des clients
Les clients de Stuvia ont évalués plus de 700 000 résumés. C'est comme ça que vous savez que vous achetez les meilleurs documents.
L’achat facile et rapide
Vous pouvez payer rapidement avec iDeal, carte de crédit ou Stuvia-crédit pour les résumés. Il n'y a pas d'adhésion nécessaire.
Focus sur l’essentiel
Vos camarades écrivent eux-mêmes les notes d’étude, c’est pourquoi les documents sont toujours fiables et à jour. Cela garantit que vous arrivez rapidement au coeur du matériel.
Foire aux questions
Qu'est-ce que j'obtiens en achetant ce document ?
Vous obtenez un PDF, disponible immédiatement après votre achat. Le document acheté est accessible à tout moment, n'importe où et indéfiniment via votre profil.
Garantie de remboursement : comment ça marche ?
Notre garantie de satisfaction garantit que vous trouverez toujours un document d'étude qui vous convient. Vous remplissez un formulaire et notre équipe du service client s'occupe du reste.
Auprès de qui est-ce que j'achète ce résumé ?
Stuvia est une place de marché. Alors, vous n'achetez donc pas ce document chez nous, mais auprès du vendeur joellel3s. Stuvia facilite les paiements au vendeur.
Est-ce que j'aurai un abonnement?
Non, vous n'achetez ce résumé que pour €3,99. Vous n'êtes lié à rien après votre achat.
Peut-on faire confiance à Stuvia ?
4.6 étoiles sur Google & Trustpilot (+1000 avis)
80467 résumés ont été vendus ces 30 derniers jours
Fondée en 2010, la référence pour acheter des résumés depuis déjà 14 ans