Moleculair genetische onderzoekstechnieken SAMENVATTING HC's deel 1
64 vues 4 fois vendu
Cours
Moleculair genetische onderzoeks technieken
Établissement
Universiteit Utrecht (UU)
In deze samenvatting kan je alle informatie terugvinden die gegeven werd tijdens de hoorcolleges van MGOT deel 1. Hierbij zijn dus de hoorcolleges 1 t/m 9 verwerkt met alle afbeeldingen van de slides op een paar na.
Hoorcollege 1 Uitwisseling van genetisch materiaal door bacteriën
Eukaryoten vs prokaryoten replicatie
- ORI start de replicatie
+ bij prokaryoten → 1 ORI,
+ bij eukaryoten → veel ORI’s,
replicatievorken die bij elkaar
komen zorgen vervolgens dat
het gerepliceerde DNA aan
elkaar gezet wordt
Prokaryoten: repliceert ook terwijl het DNA al
aan het repliceren is, omdat het dan heel snel
kan delen
Eukaryoten: replicatie vindt op verschillende
plekken plaatst
Eukaryoten: mitotische chromosomen
Prokaryoten: deling gaat veel sneller, omdat
het DNA niet uitgepakt hoeft te worden zoals
bij eukaryoten dat verpakt ligt om
nucleosomen als chromatine + DNA replicatie
vindt 1 kant op plaatst
Plasmiden
- extrachromosomaal DNA in bacteriën
- bevatten meestal niet belangrijke genen
- deze genen kunnen wel dus eigenschappen hebben om bijvoorbeeld resistent te
worden tegen bepaalde antibiotica, waardoor het de overleving van de bacterie
vergroot door zijn aanpassingsvermogen
- ook liggen de symbiose genen en pathogeniteit(wat een bacterie gevaarlijk maakt om
als pathogeen te fungeren) vaak op plasmiden
- circulair
- replicatie en behouden van plasmiden is voornaamste doel ervan
→ eigenschappen
+ eigen ORI, repliceert onafhankelijk van
chromosoom
+ eiwitten voor initiatie
+ geel = toxine gen
+ grijs = immunogen = antidote gen
Ori bepaald:
, + host range = in welke bacterie de plasmide kan repliceren
+ copy nr = kijkt eerst hoeveel plasmiden er al zijn
+ compatibiliteit = er mogen alleen plasmiden met een verschillende ori in de bacterie
zijn dus dan moet ie kiezen, welke plasmiden kunnen naast elkaar bestaan in de cel
plasmid copy nr
- single copy → 1 plasmide per bacterie
- multiple copy → als er al veel plasmiden in bacterie zit krijgen de dochtercellen ook
sowieso plasmiden in de cel, dus wel random
Om voor een plasmide in leven te blijven moet een
plasmiden heel veel repliceren, en gebruikt het zijn
antidote gen om bacterie in leven te houden en killer
om de bacterie af te breken dus het is voor de
bacterie van belang om plasmide in stand te houden
zodat het antidote niet afgebroken wordt
DNA coiling
+ plasmiden vaak in een supercoiling vorm,
waardoor er een spanning op het DNA
molecuul ontstaat (knipje en draaiing)
+ nick = knipje in 1 van de strengen →
maakt het mogelijk makkelijker om DNA
te repliceren en genen te maken
+ supercoiled DNA
DNA gelelektroforese
+ DNA op grootte scheiding, kleine
fragmenten gaan sneller
+ supercoiled gaat sneller door de gel dan
een nicked DNA molecuul (DNA zonder
spanning met 1 breuk) en lineair met 2
breuken gaan gemiddeld snel en die wordt
gebruikt voor bepalen van de grootte van
het DNA
+ dus de vorm van het DNA bepaald hoe
snel het door de gel gaat
+ ethidium bromide gaat tussen DNA zitten
wat het laat fluoresceren
EtBr → verandert de mobiliteit van het DNA door
veranderde topologie
- carcinogeen
,Conjugatie
F plasmide
- Donor F+ bindt alleen aan een bacterie met F- via de pili,
dus als het F plasmide er nog niet is,
- F+ bacterie trekt pilus terug zodat de bacteriën bij elkaar
gebracht worden en wordt er een enkelstrengse plasmide
overgebracht
- nick van plasmide in DNA op oriT en vervolgens
DNA polymerase om 1 streng vrij te maken en
de F+ plasmide weer te voorzien van een DNA
streng
Ori T = conjugatie startpunt
→ bepaalde genen nodig voor DNA overdracht
+ tra gen = pilus gen
+ groot operon met transfer genen = voor
aanmaken kanaal en DNA vrijmaken
Als het F plasmide in een genoom integreert wordt het een episome genoemd
Transductie
Faag lambda infectie
- lineair dna wat complementair is en circulair
wordt in de cel
+ Lysogene route, integratie van faag in het
genoom (profaag) en kan bij heractivatie weer
geexisteert worden en weer als los circulair
DNA in de cel komen
+ Lithische route, snelle replicatie en lyseert de
cel (plaques zijn te zien in het lab waar geen
bacteriën zich bevinden), doet het eigenlijk meer
zelf dan de lysogene route
, Bacterie DNA overdracht dmv fagen
- fagen kunnen per ongeluk een bepaald gen overbrengen waardoor het DNA van de
bacterie verandert
- dit levert bacteriën met verschillende eigenschappen waardoor ze juist wel of niet
bijvoorbeeld op een
bepaald medium kunnen
groeien
Transformatie
+ DNA naar binnen de cel
krijgen van buiten de cel
+ enkelstrengs →
dubbelstrengs →
recombinatie → ingebracht
in het genoom
- soms nuttig, soms nadelig
Verschillende methode voor transformatie in het lab
- CaCl2 → poriën + binding DNA op de cel, heat shock en DNA kan naar binnen
- Electroporatie → elektrische lading op bacteriën voor poriën en DNA kan naar binnen
en poriën herstellen zich
- Particle bombardment → DNA-coated beads kunnen door hoge druk door de cel en
kern komen waardoor je naakt DNA kan binnen brengen
Les avantages d'acheter des résumés chez Stuvia:
Qualité garantie par les avis des clients
Les clients de Stuvia ont évalués plus de 700 000 résumés. C'est comme ça que vous savez que vous achetez les meilleurs documents.
L’achat facile et rapide
Vous pouvez payer rapidement avec iDeal, carte de crédit ou Stuvia-crédit pour les résumés. Il n'y a pas d'adhésion nécessaire.
Focus sur l’essentiel
Vos camarades écrivent eux-mêmes les notes d’étude, c’est pourquoi les documents sont toujours fiables et à jour. Cela garantit que vous arrivez rapidement au coeur du matériel.
Foire aux questions
Qu'est-ce que j'obtiens en achetant ce document ?
Vous obtenez un PDF, disponible immédiatement après votre achat. Le document acheté est accessible à tout moment, n'importe où et indéfiniment via votre profil.
Garantie de remboursement : comment ça marche ?
Notre garantie de satisfaction garantit que vous trouverez toujours un document d'étude qui vous convient. Vous remplissez un formulaire et notre équipe du service client s'occupe du reste.
Auprès de qui est-ce que j'achète ce résumé ?
Stuvia est une place de marché. Alors, vous n'achetez donc pas ce document chez nous, mais auprès du vendeur analuzdevries. Stuvia facilite les paiements au vendeur.
Est-ce que j'aurai un abonnement?
Non, vous n'achetez ce résumé que pour €7,52. Vous n'êtes lié à rien après votre achat.
