Notes de cours
Onderzoeksmethoden Thema 3 Flowcymetrie
- Cours
- Établissement
Hoorcollege over flowcymetrie en het protocol is uitgebreid en overzichtelijk uitgewerkt in dit document.
[Montrer plus]
Vendeur
S'abonner
fleurheling
Avis reçus
Aperçu du contenu
FLOWCYMETRIEHOORCOLLEGE FLOWCYMETRIE
Betekenis flowcymetrie
• Flow: cellen in beweging
• Cyto: cellen
• Metry: meten
• Een technologie die gelijktijdig meerdere fysieke kenmerken van afzonderlijke deeltjes,
gewoonlijk cellen, meet en analyseert terwijl zij in een vloeistofstroom door een lichtbundel
stromen.
• De metingen worden per cel verricht op een routinesnelheid van 500 tot 4000 cellen per seconde
• FACS: Fluorescence Activated Cell Sorting. Je meet dan niet alleen, maar je gaat ze ook sorteren.
Wat kunnen we analyseren met FC?
• Meercellige organisme
• Eukaryotische cellen
• Cellulaire organellen
• Bacteriën
• Liposomen
• Virussen
• Enkele moleculen
Wat kan FC ons vertellen over een cel?
• Relatieve grootte (Forward Scatter – FSC)
o Verstrooit licht
o Gerelateerd aan de celoppervlak
o Wordt in de lijn met het licht gemeten: Light Scatter Diode
• Relatieve interne complexiteit (Side Scatter – SSC)
o Gereflecteerd en gebroken licht
o Heeft te maken met cel granuliteit en complexiteit
o Wordt op 90 graden van de laser gemeten
• Relatieve fluorescentie intensiteit (FL1, FL2, FL3, FL4, etc.)
Scatter Plot
• Hoe groter de cel, hoe verder naar rechts de stop op de x-as zit.
• Hoe complexer de cel, hoe hoger deze op de y-as zit.
• Voorbeeld: lymfocyten, monocyten, granulocyten.
Fluorescentie
• De verschillende fluorochromen absorberen het laserlicht
(=excitatie/absorptie) en zenden licht uit met een hogere
golflengte (= emissie)
• Kleur (emissiegolflengte) van dit licht is afhankelijk van het
gebruikte fluorochroom.
• Een fluorescente groep wordt aangeslagen met de laser, deze
komt in een hogere energie staat, vervalt en emitteert licht met
ietjes minder energie, de golflengte wordt dus hoger.
• Mate van fluorescentie geeft maat van binding weer, laag en
hoog positief voor de marker
• Strokes shift: het verschil tussen de golflengte van absorptie en emissie
, •
Werking flowcell
• De cellen uit de monsterbuis worden in de mantelstroom geïnjecteerd.
• De stroom in een stroomcel is laminair: je zit in het midden van je sample.
• Het hydrodynamische focussing (concentratie op 1 plek) duwt de cellen om 1
lijn te vormen langs hun lange as (horizontaal)
• De vorm van de flowcel verstrekt de mogelijkheid voor hydrodynamisch
focussing van de cellen.
Werking flowcytometer
• Vloeistofsysteem
o Pomp brengt sheat fluid op druk
o Sheat fluid loopt door een filter
o Sheat fluid gaat door een flowcell
o Eindigt in afval vat
o Injectienaald injecteert in flowcell
o Verdwijnt hierna ook in afval vat
→ Om de cellen in te brengen en te focussen
voor ondervraging
• Hydrodynamic focusing
o In de flowcell is het belangrijk dat de
cellen een voor een door de laserstraal
gaan
o Je hebt een continue stroming van de
sheath vloeistof, je sample wordt daar met een iets hogere druk ingevoerd
o De sheath vloeistof drukt hierdoor de sample samen, omdat deze stromen niet mengen krijg
je laminaire stroming waarin alle cellen oplijnen.
Les avantages d'acheter des résumés chez Stuvia:
Qualité garantie par les avis des clients
Les clients de Stuvia ont évalués plus de 700 000 résumés. C'est comme ça que vous savez que vous achetez les meilleurs documents.
L’achat facile et rapide
Vous pouvez payer rapidement avec iDeal, carte de crédit ou Stuvia-crédit pour les résumés. Il n'y a pas d'adhésion nécessaire.
Focus sur l’essentiel
Vos camarades écrivent eux-mêmes les notes d’étude, c’est pourquoi les documents sont toujours fiables et à jour. Cela garantit que vous arrivez rapidement au coeur du matériel.
Foire aux questions
Qu'est-ce que j'obtiens en achetant ce document ?
Vous obtenez un PDF, disponible immédiatement après votre achat. Le document acheté est accessible à tout moment, n'importe où et indéfiniment via votre profil.
Garantie de remboursement : comment ça marche ?
Notre garantie de satisfaction garantit que vous trouverez toujours un document d'étude qui vous convient. Vous remplissez un formulaire et notre équipe du service client s'occupe du reste.
Auprès de qui est-ce que j'achète ce résumé ?
Stuvia est une place de marché. Alors, vous n'achetez donc pas ce document chez nous, mais auprès du vendeur fleurheling. Stuvia facilite les paiements au vendeur.
Est-ce que j'aurai un abonnement?
Non, vous n'achetez ce résumé que pour €4,49. Vous n'êtes lié à rien après votre achat.
Peut-on faire confiance à Stuvia ?
4.6 étoiles sur Google & Trustpilot (+1000 avis)
79373 résumés ont été vendus ces 30 derniers jours
Fondée en 2010, la référence pour acheter des résumés depuis déjà 14 ans