Dissertation
Biochemie labo: Tweecomponenten analyse van NAD en NADH/ chemie-biochemie
- Cours
- Biochemie
- Établissement
- Karel De Grote-Hogeschool (KdG)
Verslag van het labo tweecomponenten analyse van NAD en NADH voor het vak biochemie
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Aperçu du contenu
2021/2022Tweecomponentena
nlyse van NAD en
NADH
BIOTECHNOLOGIE 3CB
[BEDRIJFSNAAM] | [Bedrijfsadres]
, 3CB uitvoering labo: 18/10/2021
Inhoud
1. Inleiding..............................................................................................................................................2
1.1 Doel..............................................................................................................................................2
2. Procedure...........................................................................................................................................3
2.1 Reagentia......................................................................................................................................3
2.1.1 Fosfaatbuffer (1000 mL)........................................................................................................3
2.1.2 -stockoplossing (25 mL).........................................................................................................3
2.1.3 NADH -stockoplossing (25 mL)...............................................................................................3
2.1.4 -standaarden (telkens 25 mL)................................................................................................3
2.1.5 NADH -standaarden (telkens 25 mL)......................................................................................4
2.1.6 / NADH -standaard (25 mL)....................................................................................................4
2.1.7 Opmerkingen.........................................................................................................................4
2.2 Werkwijze.....................................................................................................................................4
3. Berekeningen......................................................................................................................................5
3.1 Fosfaatbuffer 0,05M met pH 7,40 (1000 mL)................................................................................5
3.2 - stockoplossing 0,05 M (1000 mL)..............................................................................................6
3.3 – stockoplossing 0,05 M (1000 mL)..............................................................................................6
3.4 - stockoplossing (25 mL) M in 0,05 M fosfaatbuffer pH 7,40........................................................6
3.5 NADH- stockoplossing (25 mL) M in 0,05 M fosfaatbuffer pH 7,40...............................................6
3.6 -standaarden (25 mL per standaard) in 0,05 M fosfaatbuffer pH 7,40.........................................7
3.7 NADH -standaard in 0,05 M fosfaatbuffer pH 7,40.......................................................................7
3.8 /NADH- standaard (25 mL)...........................................................................................................8
4. Resultaten...........................................................................................................................................9
4.1 Absorbanties van , NADH en /NADH.............................................................................................9
4.2 Absorbanties van de 5 -standaarden..........................................................................................10
4.3 Absorbanties van de 5 NADH-standaarden................................................................................12
4.4 /NADH-standaard.......................................................................................................................14
4.5 Bepaling van de onbekende........................................................................................................15
5. Besluit...............................................................................................................................................16
Referentielijst.......................................................................................................................................16
Bijlage...................................................................................................................................................17
Instructies.........................................................................................................................................17
Absorbantiespectrum , NADH en /NADH..........................................................................................19
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, 3CB uitvoering labo: 18/10/2021
Absorbanties.....................................................................................................................................20
Absorbanties NADH..........................................................................................................................21
Absorbanties Onbekende.................................................................................................................21
1. Inleiding
Een oplossing die twee componenten bevat die onderling geen interactie vertonen, is een
oplossing waarvan de lichtabsorbantie additief is. Dit betekent dat de totale absorbantie van
het mengsel met de twee componenten bij elke golflengte gelijk is aan de som van de
afzonderlijke absorbanties van component 1 en component 2.
Stel dat er geen interactie is tussen de twee componenten van het mengsel dan kunnen de
concentraties van de componenten bepaald worden aan de hand van spectrofotometrische
metingen bij twee verschillende golflengte. Deze golflengten zijn zodanig gekozen dat bij
elke golflengte één van beide componenten sterk en de andere zwak absorbeert. Uit de
absorbantiespectra kunnen de meest geschikte golflengten afgeleid worden.
De concentraties van de componenten in het mengsel kunnen berekend worden aan de
hand van de wet van Lambert-Beer.
Ai= j ij .d . Cj
Waarbij:
A = Absorbantie
ε = molaire absorbantiecoëfficiënt (L/mol.cm)
d = lichtweg (cm)
i = golflengte aanduiding
j = component aanduiding
C = concentratie (mol/L)
Aangezien er twee verschillende golflengten worden gemeten geldt het volgde stelsel:
Ai=ε 11∗d∗C1 + ε 12∗d∗C 2
Ai=ε 21∗d∗C1 + ε 22∗d∗C 2
In het stelsel zijn C 1 en C 2 onbekend. De 4 molaire absorbantiecoëfficiënten kunnen bepaald
+¿ ¿
worden met behulp van de ijkcurven voor NAD en NADH.
1.1 Doel
Het doel van deze proef is om de concentratie van NAD+¿ ¿ en NADH te bepalen. Hierbij
zullen eerst twee golflengten bepaald worden door standaardreeksen op te stellen, een
+¿ ¿ +¿ ¿
NAD -standaardreeks, een NADH-standaardreeks en een NAD /NADH-standaardreeks.
+¿ ¿
Naast het bepalen van de concentraties van NAD en NADH wordt ook een onbekende
+¿ ¿
gegeven. Deze onbekende wordt bereid vanuit de NAD en NADH stockoplossingen.
2
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