Samenvatting Uitgewerkte methodes DNA, RNA en eiwitten
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Cours
Biotechnologie en maatschappij (BB1BIOT09)
Établissement
Universiteit Utrecht (UU)
In dit document staat een samenvatting over alle DNA, RNA en eiwit technieken die langskomen in de cursus. Daarnaast is er informatie opgenomen over plasmides, (non-)homologe end joining, gist kunstmatig chromosoom (YAC), ect.
BLAUW WIT [IDENTIFICEREN] [IDENTIFICEREN VAN
SCREENING BACTERIËN MET RECOMBINANT
DNA IN HET LACZ GEN]
PCR Vermenigvuldigen Vermenigvuldigen van DNA
COLONY BLOTTING Identificeren Identificeren van kolonies met
gewenst DNA fragment
AGAROSE Scheiden Scheiden van DNA/RNA
GELELEKTROFORESE fragmenten op grootte
Kleine fragmenten gaan snel en
grote gaan langzaam
SOUTHERN BLOT Identificeren Identificeren van een DNA
fragment na gel elektroforese
NORTHERN BLOT Identificeren Identificeren van een RNA
fragment na gelelektroforese
FISH Identificeren Identificeren van een DNA
fragment op een bepaald
chromosoom
SEQUENCING Sequencen DNA sequentie bepalen met
dedeoxynucleotiden
RT-PCR Genexpressie Genexpressie bepalen van één
bepalen specifiek gen. “Reverse
transcription (RT)-PCR is used to
amplify RNA targets. The RNA
template is converted into
complementary (c)DNA by the
enzyme reverse transcriptase.
The cDNA serves later as a
template for exponential
amplification using PCR.”
CDNA MICROARRAY Genexpressie Genexpressie bepalen van
bepalen meerdere genen tegelijkertijd
RNA SEQUENCING Genexpressie Genexpressie bepalen van
bepalen meerdere genen tegelijkertijd
CRISPR CAS9 Gene editing Uitschakelen van genen of
introduceren van DNA
fragmenten
WESTERN BLOT Identificeren Identificeren van een enkel eiwit
na SDS-PAGE
ELISA Identificeren Identificeren van een eiwit in
meerdere monsters tegelijk
zonder SDS PAGE
SDS PAGE Scheiden Scheiden van eiwitten op basis
, van grootte
CENTRIFUGEREN | Scheiden Scheiden van eiwitten op basis
FILTREREN | SIZE van grootte
EXCLUSION
CHROMATOGRAPHY
ION EXCHANGE Scheiden Scheiden van eiwitten op basis
CHROMATOGRAPHY van lading
PRECIPITEREN | Scheiden Scheiden van eiwitten op basis
HYDROPHOBIC van hydrofobiciteit
INTERACTION
CHROMATOGRAPHY
AFFINITY Scheiden Scheiden van eiwitten op basis
CHROMATOGRAPHY van affinitei
2D GEL Scheiden Scheiden van eiwitten op basis
ELEKTROFORESE van lading én grootte
MASSA Identificeren Identificeren van eiwitten op
SPECTOMETRIE basis van de migratiesnelheid
van eiwitfragmenten
X-RAY Identificeren Identificeren van eiwitten op
KRISTALLOGRAFIE basis van röntgendiffractie van
eiwitkristallen
CRYO EM Identificeren Identificeren van eiwitten op
basis van elektronenmicroscopie
CACL2 METHODE TRANSFORMATIE TRANSFORMATIE VAN DNA
M.B.V. EEN CACL2
OPLOSSING
NADEEL: WERKT GOED OP
ECOLI, MAAR MINDER
VOOR ANDERE BACTERIËN
OF EUKARYOTEN
ELECTROPORATIE Transformatie Transformatie van DNA
m.b.v. een elektrische
schok
Voordelen: effectief, snel
en ook toepasbaar op
eukaryoten
YEAST TWO HYBRID Identificeren Identificeren van
eiwit-eiwit interacties
Eiwit A & B binden ->
transcriptie reportergen
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