Labo verslag voor het vak biotechnologie of biochemie.
Bevat 25 pagina's
Inleiding, procedure, oplossingen, Resultaten en besprekingen, besluit, antwoord op een vraagstuk en referentielijst
Goed geschreven en overzichtelijk opgebouwd met duidelijke illustraties en schema's
2. Procedure.................................................................................................. 4
2.1 Bereiding van het ruwe extract.................................................................................4
2.2 Zuivering van het ruwe extract door gelfiltratie.......................................................4
2.3 Bepaling van de efficiëntie van de zuiveringsstap....................................................4
2.3.1 Bepaling van de enzymatische activiteit............................................................4
2.3.2 Bepaling van het proteïnegehalte volgens Lowry...............................................8
2.4 Bepaling van de zuiveringsfactor en het % recovery..............................................10
2.4.1 Bepaling van zuiveringsfactor..........................................................................10
2.4.2 Bepaling van % recovery..................................................................................11
3. Oplossingen............................................................................................. 12
3.1 GHS......................................................................................................................... 12
3.2 Oplossingen bereiden.............................................................................................14
4.1 Zuivering van het ruwe extract door gelfiltratie (Äkta Start)..................................18
4.2 Bepaling van de efficëntie van de zuiveringsstap...................................................18
4.2.1 Bepaling van de enzymatische activiteit..........................................................18
4.2.2 Bepaling van het proteïnegehalte volgens Lowry.............................................23
4.3 Bepaling van de zuiveringsfactor en % recovery....................................................24
4.3.1 Zuiveringsfactor............................................................................................... 24
4.3.2 % Recovery...................................................................................................... 26
Eiwitzuivering: isolatie en
partiële zuivering van invertase
Dit verslag gaat over proef 6: Eiwitzuivering. De proef bestaat uit 4
verschillende delen. Alle aspecten worden hieronder één voor één
behandeld.
1. Inleiding
Invertase is een enzym dat de omzetting van sacharose (sucrose) tot
glucose én fructose (invertsuiker) katalyseert.
Figuur 1: Reactie invertase
Invertase kan men o.a. vinden in een mengsel dat men verkrijgt na het
autolyseren van gistcellen. Om dit invertase te isoleren uit het ruwe
invertase-extract (supernatans), worden er gepaste scheidingstechnieken
en zuiveringsstappen toegepast. Tijdens deze scheiding moet er rekening
gehouden worden met een zo hoog mogelijke zuiveringsgraad en een zo
min mogelijk verlies van het enzym (% recovery).
Om de parameters % recovery en zuiveringsgraad te bepalen, moeten er
zowel voor als na de zuiveringsstappen de nodige testen uitgevoerd
worden om de enzymatische activiteit en het proteïnegehalte van het
enzym te achterhalen.
1.1 Doel
Het doel van deze proef bestaat uit vier stappen.
In het eerste deel van de proef wordt invertase geïsoleerd uit gisten door
de autolyse van cellen. Zo verkrijgt men het ruwe invertase-extract. Dit is
het staal dat men zal onderzoeken.
In het tweede deel van de proef wordt het ruwe invertase-extract
gezuiverd. Hierbij hanteert men een scheidingsmethode, namelijk
gelfiltratie. Gelfiltratie is een techniek waarbij grote deeltjes worden
gescheiden van kleine deeltjes. De grote deeltjes zullen eerder elueren
dan de kleinere. Om de gelfiltratie te verwezenlijken, wordt er gebruik
gemaakt van het toestel Äkta Start (Cytiva).
In het derde deel van de proef wordt de efficiëntie van de zuiveringsstap
(=gelfiltratie) bepaald. Dit wordt gedaan door enerzijds de enzymatische
activiteit te bepalen en anderzijds het proteïnegehalte te bepalen volgens
Lowry. Om de enzymatische activiteit te bepalen, gebruikt men een kit,
namelijk de Invertase Assay Kit (MAK-118; Sigma Aldrich). Indien deze
2
, 3CB 04/10/2021
twee bepalingen zijn gedaan, kan er iets gezegd worden over de efficiëntie
van de zuiveringsstap.
3
Les avantages d'acheter des résumés chez Stuvia:
Qualité garantie par les avis des clients
Les clients de Stuvia ont évalués plus de 700 000 résumés. C'est comme ça que vous savez que vous achetez les meilleurs documents.
L’achat facile et rapide
Vous pouvez payer rapidement avec iDeal, carte de crédit ou Stuvia-crédit pour les résumés. Il n'y a pas d'adhésion nécessaire.
Focus sur l’essentiel
Vos camarades écrivent eux-mêmes les notes d’étude, c’est pourquoi les documents sont toujours fiables et à jour. Cela garantit que vous arrivez rapidement au coeur du matériel.
Foire aux questions
Qu'est-ce que j'obtiens en achetant ce document ?
Vous obtenez un PDF, disponible immédiatement après votre achat. Le document acheté est accessible à tout moment, n'importe où et indéfiniment via votre profil.
Garantie de remboursement : comment ça marche ?
Notre garantie de satisfaction garantit que vous trouverez toujours un document d'étude qui vous convient. Vous remplissez un formulaire et notre équipe du service client s'occupe du reste.
Auprès de qui est-ce que j'achète ce résumé ?
Stuvia est une place de marché. Alors, vous n'achetez donc pas ce document chez nous, mais auprès du vendeur antonmartens. Stuvia facilite les paiements au vendeur.
Est-ce que j'aurai un abonnement?
Non, vous n'achetez ce résumé que pour €11,39. Vous n'êtes lié à rien après votre achat.
