,Hoofdstuk 1: prepareren en observeren
van cellen en weefsels
DOEL
Cellen en weefsels observeerbaar maken voor LM of EM
PROBLEEM
Biologische materiaal = te dik om licht door te laten
1.1 Gebruik van secties
= nodig om subcellulaire details waar te nemen
1. Fixeren
Weefselstuk weggenomen uit zijn normale situatie
o Afbraakenzymen actief
o Degradatie van het weefsel
Dit tegengaan door denaturatie van eiwitten
o Bevriezen
o Chemische fixatiemiddelen
Bevriezen
- Snel werken
- Bewaart epitopen beter voor imuunkleuringen
- Gebruikt in pathologische labo’s
Chemische fixatie
- Cross linken: met formaldehyde of gluteraldehyde
o Cel/weefselcomponenten blijven bewaard
- Neerslaan = percipiteren: met alcohol of aceton
o Structurele componenten worden bewaard
- Belangrijk = in vivo structuur bewaard blijft
- Veranderingen in weefsel = artefacten vb holtes
2
, 2. Inbedden
= gefixeerde middel moet met een substantie hard gemaakt worden
o Coupes te krijgen waar stralen door kunnen
o Niet als het al bevroren geweest is
- Inbedmiddel = hydrofoob
- Moet volledig binnendringen anders slecht snijdbaar
o Water eerst verwijderen met alcohol
o Clearing met tolueen = mengbaar met alcohol en inbedmiddel
LM paraffine Dikte 5-10 Stalen messen draagglaasjes
EM Hars en plastic 60-70 nm Diamanten messen Metalen roosters
1.2 Gebruik van kleuring
= gebaseerd op verschillen in affiniteit van kleurstof voor weefselcomponenten
o Coupes worden eerst gedeparafineerd met tolueen alvorens kleuring
a. Routinekleuring
= haematoxyline -eosine = HE
= bij PH 6
- Haematoxyline = blauw, kationisch +
- Eosine = oranje, anionisch –
o Kern = blauw
o Cytoplasma = oranje
o Blauw korrelig in cytoplasma = RNA
3
, b. Kleurbaarheid organische stoffen
Proteïnen
= aminozuren
= zure (COO-) en basische (NH3+) gropen
= overmaat hangt af van IEP en PH
o Bij PH 6 vooral +
o EOSINE
Nucleïnezuren
= DNA en RNA
= in kern
o HAEMATOXYLINE
Koolhydraten
= vaak verbonden met andere moleculen
= lossen op in waterig fixatief => gaan verloren
o Stof toevoegen die koolhydraten neerslaat
o Kleurbaar met cationische kleurstoffen
o Kunnen kleuromslag veroorzaken
= metachromasie in kraakbeen en mastcellen
Lipiden
= lossen op in alcohol
o Lege vlekken op LM
= fixatie met OsO4 bij EM
o Vetzuren bewaard bij fixatie + visualiseerbaar
c. Specifieke kleurtechnieken
Indifferente kleurstoffen
= kleuren vetten aan
= oil red O
Immunohistochemische kleuring
= kleuren specifieke bestanddelen aan op basis van
antigen/antilichaam binding
= antilichaam wordt voorzien van kleurstof
=DAB
Enzymkleuring
= activiteit aantonen
= gebruik van enzym specifiek substraat
= reactie = waarneembare neerslag
= G6PD kleuring
4
Les avantages d'acheter des résumés chez Stuvia:
Qualité garantie par les avis des clients
Les clients de Stuvia ont évalués plus de 700 000 résumés. C'est comme ça que vous savez que vous achetez les meilleurs documents.
L’achat facile et rapide
Vous pouvez payer rapidement avec iDeal, carte de crédit ou Stuvia-crédit pour les résumés. Il n'y a pas d'adhésion nécessaire.
Focus sur l’essentiel
Vos camarades écrivent eux-mêmes les notes d’étude, c’est pourquoi les documents sont toujours fiables et à jour. Cela garantit que vous arrivez rapidement au coeur du matériel.
Foire aux questions
Qu'est-ce que j'obtiens en achetant ce document ?
Vous obtenez un PDF, disponible immédiatement après votre achat. Le document acheté est accessible à tout moment, n'importe où et indéfiniment via votre profil.
Garantie de remboursement : comment ça marche ?
Notre garantie de satisfaction garantit que vous trouverez toujours un document d'étude qui vous convient. Vous remplissez un formulaire et notre équipe du service client s'occupe du reste.
Auprès de qui est-ce que j'achète ce résumé ?
Stuvia est une place de marché. Alors, vous n'achetez donc pas ce document chez nous, mais auprès du vendeur wonderkind. Stuvia facilite les paiements au vendeur.
Est-ce que j'aurai un abonnement?
Non, vous n'achetez ce résumé que pour €15,49. Vous n'êtes lié à rien après votre achat.