Resume
Samenvatting Celcultuur en immunochemie: lesnota’s flowcytometrie
- Établissement
- Universiteit Antwerpen (UA)
Lesnota’s over het deel flowcytometrie van het vak celcultuur en immunochemie.
[Montrer plus]
Aperçu du contenu
CELCULTUUR:FLOWCYTOMETRIE
Academiejaar 2018-2019
Bronnen:
Deze samenvatting is gebaseerd op de PowerPoint’s en lessen van Prof. dr. Nathalie Cools
Afbeeldingen afkomstig uit de PowerPoint’s van Prof. dr. Nathalie Cools
,LES 1
Enkele begrippen
- PARAMETER (verschillende betekenissen)
o Fysische of chemische eigenschappen van een cel
Cytoplasmic granularity or nuclear DNA content
o Fysische eigenschap, gemeten door een sensor
Light scattering or fluorescence
o Fysische eigenschap van een cel-geassocieerd reagens
Intrinsic/Extrinsic, afhankelijk of ze als dan niet gemeten kunnen met sonde
- EXCITATIE
o Proces waarbij optische energie geabsorbeerd wordt
- EXTINCTIE COEFFICIENT (ε)
o Efficiëntie waarmee optische energie geabsorbeerd wordt (afhankelijk v golflengte)
- EMISSIE
o Proces waarbij optische energie terug vrijgesteld wordt
- QUANTUM OPBRENGST(Q)
o Efficiëntie waarmee energie wordt vrijgesteld (0-1), meestal als fluorescentie
o Onafhankelijk van golflengte
- STOKES SHIFT
o Verschil in energie tussen excitatie en emissie golflengte max
- SPECTRUM
o Verdeling van excitatie en emissie golflengtes
Flow cytometrie - definitie
- Analyse van het woord:
o Flow = vloeistof
o Cyto = cel
o Metrie = meten
- Cytometry => fysische & chemische eigenschappen van cellen meten
- Flow cytometrie => hierbij worden metingen uitgevoerd terwijl cellen in een vloeistofsuspensie 1 voor 1
voorbij het meettoestel passeren
- Gebruik van flowcytometrie:
o Informatie over een celpopulatie verkrijgen
o + de verschillen in fysische & chemische eigenschappen tussen de cellen (=> de PARAMETERS)
o Gebeurt aan de hand van optische eigenschappen
- Flowcytometer (ruwe schets)
o Ruwe schets van wat er gebeurd:
Cellen in suspensie stromen als individuele partikels (1 voor 1) langs de laser (1 of meerdere
lasers)
Cellen gaan doorheen interrogatieunt (= waar laser de vloeistofstroom kruist)
o Belangrijk:
Cellen moeten een single cel suspensie vormen => 1 voor 1 lang de lichtbron
Cellen in die stroom brengen vereist hydrodynamische focussering
Individuele cellen verkrijgen
- Cellen/partikels in oplossing moeten erg klein zijn (0,2-150 um)
o Witte BC zijn bijvoorbeeld erg geschikt voor FCM
o Minder handig: biopten & tumorstalen
Hier: extra verwerkingsprocedure nodig (enzymatisch/mechanisch cellen dissociëren)
1
, Bouw flowcytometer
- Bevat steeds 3 delen
- Vloeistofsysteem (fluidics):
o = tank met vloeistof
o Zorgt voor transport van partikels/cellen in
vloeistofstroom naar de laser
- Optisch systeem (optics):
o Bestaat uit de laser -> aanstraling/excitatie van de
partikels
o Optische filters -> lichtsignaal naar juiste detector leiden
- Elektronica
o Zet lichtsignaal om in meetbaar elektronisch signaal
o Elektronisch signaal gaat verwerkt worden door de pc
Vloeistofsysteem
- Belangrijkste functie = transport van partikels
- 3 delen
o Sheath tank met geleidingsvloeistof
Zorgt voor hydrodynamische focussering
o Sample tube
o ‘Flow cell’
= hart van de flowcytometer
Daar: hydrodynamische focussering
- Druk:
o Druk sample hoger dan druk geleidingsvloeistof
o Druk op staal zelf ook groter dan druk op tank
- Optimale aanstraling gebeurt als:
o Celsuspensiestroom centraal in de laser ligt
o Maar 1 partikel/cel doorheen de laser gaat
- 2 belangrijke zaken zorgen ervoor dat cellen 1 voor 1 vloeien voorbij laser:
o Laminaire flow
o Hydrodynamische focussering
- Hydrodynamische focussering
o Doel = juiste oriëntatie van cel t.o.v. meetapparaat krijgen
Zorgt dat cellen 1 voor 1 aangestraald zullen
worden
o “Een hoog volume van het sample wordt in kleine
volume geforceerd in de flow cell”
Celsuspensie wordt “gespoten” in de
geleidingsvloeistof
Celsuspensie gaat in 1 rechte straal gaan
o Voorwaarde = laminaire stroom
Enkel als beide laminaire stroom hebben kan
je een vloeistof in een andere injecteren & gaan de vloeistoffen niet mengen
Wordt verkregen dankzij drukverschil in tube & tank
o Geleidingsvloeistof heeft grotere snelheid
Zorgt dat cellen 1 voor 1 zullen vloeien
Versnelt de suspensie -* partikels/cellen beperkt tot de centrale ruimte
- stroom laminair of turbulent? => getal van Reynolds:
o Formule: Re = d ρ v / η
d = diameter tube, ρ = vloeistofdensiteit, v = vloeistofsnelheid, η = viscositeit
o Bij Re < 2300 => laminaire stroom
2
Les avantages d'acheter des résumés chez Stuvia:
Qualité garantie par les avis des clients
Les clients de Stuvia ont évalués plus de 700 000 résumés. C'est comme ça que vous savez que vous achetez les meilleurs documents.
L’achat facile et rapide
Vous pouvez payer rapidement avec iDeal, carte de crédit ou Stuvia-crédit pour les résumés. Il n'y a pas d'adhésion nécessaire.
Focus sur l’essentiel
Vos camarades écrivent eux-mêmes les notes d’étude, c’est pourquoi les documents sont toujours fiables et à jour. Cela garantit que vous arrivez rapidement au coeur du matériel.
Foire aux questions
Qu'est-ce que j'obtiens en achetant ce document ?
Vous obtenez un PDF, disponible immédiatement après votre achat. Le document acheté est accessible à tout moment, n'importe où et indéfiniment via votre profil.
Garantie de remboursement : comment ça marche ?
Notre garantie de satisfaction garantit que vous trouverez toujours un document d'étude qui vous convient. Vous remplissez un formulaire et notre équipe du service client s'occupe du reste.
Auprès de qui est-ce que j'achète ce résumé ?
Stuvia est une place de marché. Alors, vous n'achetez donc pas ce document chez nous, mais auprès du vendeur biomed2017. Stuvia facilite les paiements au vendeur.
Est-ce que j'aurai un abonnement?
Non, vous n'achetez ce résumé que pour €0,00. Vous n'êtes lié à rien après votre achat.
Peut-on faire confiance à Stuvia ?
4.6 étoiles sur Google & Trustpilot (+1000 avis)
80364 résumés ont été vendus ces 30 derniers jours
Fondée en 2010, la référence pour acheter des résumés depuis déjà 14 ans