Resume
Geïntegreerd practicum 1 (biochemie): samenvatting
- Établissement
- Universiteit Antwerpen (UA)
Samenvatting van de theorie die hoort bij de experimenten van het vak geïntegreerd practicum 1 (biochemie). Score: 18/20
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GEÏNTEGREERD PRACTICUMBIOCHEMIE:
SAMENVATTING
Academiejaar 2019-2020
Bronnen:
Samenvatting gemaakt a.d.h.v. de uitleg gegeven tijdens de inleidingsles en het practicum door Prof. Eva Geuens.
Afbeeldingen afkomstig uit de PowerPoint van de inleidingsles van Prof. Eva Geuens.
,Inhoudsopgave
Algemeen ............................................................................................................................................................................................ 2
Vraagstukken .................................................................................................................................................................................. 2
Berekeningen hoe een oplossing te maken .................................................................................................................................... 2
Berekenen van verdunningsreeksen ............................................................................................................................................... 3
Principe van ijklijn en kalibratie ermee kunnen toepassen ............................................................................................................ 3
Experiment 1 ....................................................................................................................................................................................... 4
Homogenisatie via Potter homogenisatie....................................................................................................................................... 4
Differentiële centrifugatie .............................................................................................................................................................. 4
Principe van SDH assay kennen ...................................................................................................................................................... 4
Beschrijving experiment 1............................................................................................................................................................... 5
Experiment 2 ....................................................................................................................................................................................... 7
Principe zoutprecipitatie en dialyse kennen ................................................................................................................................... 7
Principe eiwitconcentratiebepaling kennen en verwerking kunnen toepassen ............................................................................. 7
Principe van ionenuitwisselingschromatografie + kunnen toepassen (keuze buffer, keuze matrix).............................................. 7
Principe SDS-PAGE kennen + berekenen van stalen ....................................................................................................................... 8
Principe Western blotting kennen (positieve controle/negatieve controle/ primair antilichaam/secundair antilichaam) ........... 9
Natieve LDH iso-enzym scheiding ................................................................................................................................................... 9
Beschrijving experiment 2............................................................................................................................................................. 10
Practicum 4 ....................................................................................................................................................................................... 13
Principe fluorimetrie kennen en dataverwerking kunnen toepassen........................................................................................... 13
Beschrijving experiment 4............................................................................................................................................................. 13
Practicum 5 ....................................................................................................................................................................................... 14
Principe enzymkinetiek kennen en dataverwerking kunnen toepassen ...................................................................................... 14
Beschrijving experiment 5............................................................................................................................................................. 16
Stoffen gebruikt in practicum ........................................................................................................................................................... 17
Experiment 1 ................................................................................................................................................................................. 17
Experiment 2 ................................................................................................................................................................................. 17
Experiment 4 ................................................................................................................................................................................. 18
Experiment 5 ................................................................................................................................................................................. 18
1
, Algemeen
Vraagstukken
zie seminaries:
- S1 = concentratiebepalingen
- S2 = optische technieken
- S3 = elektrochemie (deel 1)
- S4 = elektrochemie (deel 2)
Berekeningen hoe een oplossing te maken
Formules:
𝑛
- 𝐶=
𝑉
𝑚
- 𝑛=
𝑀𝑀
- 𝐶1 ∗ 𝑉1 = 𝐶2 ∗ 𝑉2
Oplossing maken:
𝒏 𝒎
1) bereken hoeveel gram Formules: 𝑪 = met 𝒏 =
𝑽 𝑴𝑴
vaste stof je nodig hebt
2) weeg juiste gewicht af Plaats object (beker/schuitje) op balans, druk op TARRE, weeg juiste product af
Keuze balans/object:
2 typen balansen
o Gewone balans op 2 cijfers na komma (voor alles > 1g)
o Analytische balans op 4 cijfers na komma (voor alles < 1g)
Afwegen in:
o Beker oplossing met 1 component
o Weegschuitje oplossing met meerdere componenten
Opmerking
Kies juiste beker (zo dicht mogelijk bij eindvolume, maar alles moet er wel in gaan)
Streepjes op de beker zijn onnauwkeurig! (niet exact)
3) oplossing maken Stap 1: doe 3/4e van eindvolume in beker
Vb.: oplossing van 200 ml voeg al 150 ml toe
Waarom?
o Sommige oplossingen moeten op pH gemaakt worden (dus eerst een
zuur/base toevoegen)
o Stel: ineens eindvolume molariteit klopt niet meer
o MAAR: water toevoegen pH verandert niet
Stap 2: oplossen
Doe magnetisch roersteentje in beker
Zet beker op roerplaat
Wacht tot alles is opgelost
Stap 3: maak correct eindvolume
Giet de oplossing over in object met juiste eindvolume (200 ml):
o In een kolf is het meest nauwkeurig
o In maatcilinder bij kleurstoffen of schuimende oplossingen
Roersteentje mag niet in kolf (houdt ander roersteentje tegen bodem)
Vul aan met gedestilleerd water
Stap 4: homogeniseren
Sluit kolf af m.b.v. een polymeer parafilm
o Over opening trekken
o Ong. 3-4 x erover doen
Schudden & zo verder doen oplossen
2
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