ZEER uitgebreide cursus die ik zelf heb opgesteld omdat ik nood had aan een ordelijke en uitgebreide cursus om methoden 3 te kunnen studeren.
In dit document staat de informatie vanop de slides gecombineerd met de mondelinge uitleg die werd gegeven tijdens de hoorcolleges.
, 1. Sequentiebepaling
1.1. Edman degradatie
Werking:
Gezuiverd eiwit PITC aan toevoegen, bestaat uit 2 delen: aromatische ring (helpt achteraf de
detectie: absorbeert licht) en de reactieve chemische groep (bindt aan de amino terminus van een
eiwit door een nucleofiele aanval)
Dan pH verandering shuffling van elektronen uiteindelijk gaat het laatste aminozuur
afgesplitst worden van het eiwit en gaat hangen aan de aromatische groep die te meten is
HPLC (high performance liquid chromatography) doen elk AZ heeft een andere retentietijd: obv
dit kan je zien welk aminozuur afgesplitst is
Dit dan 50x doen
Zeer omslachtige sequentiebepaling; 40-60 AZ per peptide nu geautomatiseerd; eiwitsequenties
opgeslagen in databanken bv Swiss-Prot.
Sequentie dikwijls afgeleid van DNA-databanken. Meer en meer sequentiebepaling via massa
spectrometrie
1.2. Eiwit sequentiebepaling via massa spectrometrie
2 grote strekkingen: MALDI-TOF vs MS/MS
Beginnen met een gezuiverd eiwit (door kolomchromatografie of via 2D-gel dus scheiding volgens
lading en volgens massa)
Stap 1: Eiwit knippen met protease Bij voorkeur trypsine (alle peptides gaan 2 dezelfde ladingen
hebben):
o Endopeptidase trypsine knipt aan C-terminale zijde van Arg & Lys (hebben positieve lading)
alle peptides gaan dan eindigen met een positieve lading
o levert peptiden van ≤ 20 AZ
o peptiden hebben een C-terminaal basisch residu
o na ionisatie: 2 pos ladingen: NH2 terminaal en C-terminaal
eenvoudiger spectrum als alle peptiden een dubbele lading hebben (spectrogram:
rangschikking volgens massa)
29
Les avantages d'acheter des résumés chez Stuvia:
Qualité garantie par les avis des clients
Les clients de Stuvia ont évalués plus de 700 000 résumés. C'est comme ça que vous savez que vous achetez les meilleurs documents.
L’achat facile et rapide
Vous pouvez payer rapidement avec iDeal, carte de crédit ou Stuvia-crédit pour les résumés. Il n'y a pas d'adhésion nécessaire.
Focus sur l’essentiel
Vos camarades écrivent eux-mêmes les notes d’étude, c’est pourquoi les documents sont toujours fiables et à jour. Cela garantit que vous arrivez rapidement au coeur du matériel.
Foire aux questions
Qu'est-ce que j'obtiens en achetant ce document ?
Vous obtenez un PDF, disponible immédiatement après votre achat. Le document acheté est accessible à tout moment, n'importe où et indéfiniment via votre profil.
Garantie de remboursement : comment ça marche ?
Notre garantie de satisfaction garantit que vous trouverez toujours un document d'étude qui vous convient. Vous remplissez un formulaire et notre équipe du service client s'occupe du reste.
Auprès de qui est-ce que j'achète ce résumé ?
Stuvia est une place de marché. Alors, vous n'achetez donc pas ce document chez nous, mais auprès du vendeur leenhaegemans. Stuvia facilite les paiements au vendeur.
Est-ce que j'aurai un abonnement?
Non, vous n'achetez ce résumé que pour €5,49. Vous n'êtes lié à rien après votre achat.
