Resume
Samenvatting les celfractionatie
- Établissement
- Universiteit Antwerpen (UA)
Samenvatting les celfractionatie
[Montrer plus]
Aperçu du contenu
CelfractionatieScheiden en zuiveren van cellen en celorganellen: inleiding
Zuiveren van cellen:
Centrifugatie op gradiënt
Immunomagnetische scheiding
Celsorting
Zuivering van celorganellen:
Homogenisatiemedium
Homogenisatietechnieken: mechanisch, enzymatisch, detergenten
Fractionatie cel- en weefselhomogenaat
Waarom? in primaire culturen en weefsels zitten meer dan 1 celtype, gemengde culturen laten niet
toe een effect aan 1 celtype toe te schrijven
Scheiden en zuiveren van cellen
Centrifugatie
Evenwichtsdichtheits- of gradiëntdichtsheids- of isopycnische centrifugatie
Scheiden van de componenten o.b.v. dichtheid
Dichtheidsgradiënten worden bekomen door verschillende lagen gradiënt media op elkaar te
plaatsen in een proefbuis
o Na centrifugatie: zwaarste laag onderaan, lichtste bovenaan
o Componenten uit de oplossing zinken naar beneden tot de positie wordt bereikt
waar de dichtheid van de omgevende vloeistof dezelfde is als die van de component
Als evenwicht wordt bereikt -> duur van centrifugatie heeft geen belang meer
Toepassing: lymfocyten
-> uit bloed kunnen 1-2 x 10^6 lymfocyten/ml worden opgezuiverd waarvan 98%
CD45+ (membraaneiwit dat als Ag dient op leukocyten) en bestaat uit T en B
lymfocyten
Immunomagnetische scheiding
Paramagnetische korrels (1-4,5 micrometer)
Oppervlaktelaag van de korrels bevat hydroxyl en epoxidegroepen voor covalent binden met
AL
Direct: primair AL van magneetkorrel bindt met specifiek AG in de cel
Indirect:
o Primair AL tegen specifiek AG in cel worden eerst op de cellen gebonden
o Magneetkorrels waarop secundaire AL zijn gebonden worden aan de cellen
toegevoegd
Cellen gebonden aan magneetkorrels door Ag-AL reactie worden gecollecteerd door
magneet aan de zijkant van celbevattend recipiënt te plaatsen
1
, Toepassing: isolatie van bepaald celtype, verwijderen van ongewenste cellen uit een mengsel
Flowcytometrie
= techniek die multiparametrische analyse van cellen of deeltjes toelaat terwijl ze in een
vloeistofstroom cel per cel doorheen een laserstraal passeren
Kenmerken van individuele cellen meten door hun interactie met laser
Cellen/deeltjes scheiden van elkaar
Opbouw
Fluïdum
Optisch systeem
Detectiesysteem
Celsortingssysteem
1. Single cell suspension
2. Aan cellen wordt een fluorochroom-geconjugeerd AL toegevoegd
3. Fluïdum systeem: staal vloeistofstroom waar de cellen opgelijnd worden zodat ze 1 voor
1 door het analyse/detectiepunt passeren (hydrodynamische focusering)
Hydrodynamische focusering:
-> deeltjesbevattendevloeistof wordt door cilinder gestuurd -> snelheidsgradiënt ontstaat bij
de deeltjes door wrijving t.h.v. de cilinderwand (viscous drag)
-> deeltjes worden naar centrum van vloeistofstroom gesleept (dragging)
4. Flow chamber: oplijning van cellen
-> 2 concentrisch vloeistofbevattende cilinders
2
Les avantages d'acheter des résumés chez Stuvia:
Qualité garantie par les avis des clients
Les clients de Stuvia ont évalués plus de 700 000 résumés. C'est comme ça que vous savez que vous achetez les meilleurs documents.
L’achat facile et rapide
Vous pouvez payer rapidement avec iDeal, carte de crédit ou Stuvia-crédit pour les résumés. Il n'y a pas d'adhésion nécessaire.
Focus sur l’essentiel
Vos camarades écrivent eux-mêmes les notes d’étude, c’est pourquoi les documents sont toujours fiables et à jour. Cela garantit que vous arrivez rapidement au coeur du matériel.
Foire aux questions
Qu'est-ce que j'obtiens en achetant ce document ?
Vous obtenez un PDF, disponible immédiatement après votre achat. Le document acheté est accessible à tout moment, n'importe où et indéfiniment via votre profil.
Garantie de remboursement : comment ça marche ?
Notre garantie de satisfaction garantit que vous trouverez toujours un document d'étude qui vous convient. Vous remplissez un formulaire et notre équipe du service client s'occupe du reste.
Auprès de qui est-ce que j'achète ce résumé ?
Stuvia est une place de marché. Alors, vous n'achetez donc pas ce document chez nous, mais auprès du vendeur AVL2. Stuvia facilite les paiements au vendeur.
Est-ce que j'aurai un abonnement?
Non, vous n'achetez ce résumé que pour €4,49. Vous n'êtes lié à rien après votre achat.
Peut-on faire confiance à Stuvia ?
4.6 étoiles sur Google & Trustpilot (+1000 avis)
80467 résumés ont été vendus ces 30 derniers jours
Fondée en 2010, la référence pour acheter des résumés depuis déjà 14 ans