Resume
Samenvatting Verslag enzymologie_labportfolio 4
- Cours
- Chemie
- Établissement
- 2nd Degree
Eindverslag enzymologie Berekenen van vmax, Km, Ki, extinctiecoëfficiënten 15 paginas
[Montrer plus]
Vendeur
S'abonner
Aperçu du contenu
Verslaggevers: Lector:Groep:
Labportfolio semester 4: Enzymologie
Verslag enzymologie
1 Doel
Het bepalen van de Michaelis-Menten parameters K m en Vmax door middel van twee enzymatische
reacties en inhibitie. Voor deze bepaling moeten eerst de molaire extinctiecoëfficiënten van de
absorberende stoffen p-NA en p-NF bepaald worden.
2 Principe
2.1 Reacties
Continu verloop:
Benzoyl-arginine-p-nitroanilide (BAPNA) benzoyl-argenine p-nitroanilide
Figuur 1 Reactie continu methode: BAPNA met trypsine. De reactie verloopt bij T = 21°C en pH = 8,0.
Hydrolyse reactie met:
Substraat = BAPNA
Enzym : trypsine
Eindproduct: p-NA
Discontinu verloop:
p-nitrofenylfosfaat (kleurloos) p-nitrofenol (kleurloos) p-nitrofenol (geel)
figuur 2 Reactie discontinu methode: p-NPP met zure fosfatase. De reactie verloopt bij T = 21°C en pH = 5,6
Hydrolyse reactie met:
Substraat = p-NPP
Enzym : zure fosfatase
Eindproduct: p-NF
1
,2.2 Formules
Wet van Lambert-Beer
Voor de bepaling van de reactiesnelheden van bovenstaande reacties moeten de molaire
extinctiecoëfficiënten van p-NF en p-NA gekend zijn. Deze worden berekend via de wet van
Labmbert-Beer.
Wet van Lambert-Beer:
E=ɛ.l.c
Met: E: extinctie
ɛ: molaire extinctie in (M.cm)-1
l: weglengte cuvet = 1 cm
c: concentratie in mol.L-1
De gemeten extincties worden uitgezet in een extinctiecurve (E i.f.v. concentratie). De
richtingscoëfficiënt van deze ijklijn is gelijk aan de molaire extinctiecoëfficiënt.
VC-regel
V1 . C1 = V 2 . Co
V 1C1
→ Co =
V2
Met: V1: gekend beginvolume
C1: gekende beginconcentratie
V2: gekend eindvolume
Co: onbekende concentratie na verdunning
Bepalen van de molaire extinctiecoëfficiënten ɛ
ɛ = rico extinctiecurve = b (lijnschatting)
Bepalen van de reactiesnelheid v en v’: continu, discontinu met en zonder inhibitor
∆E b
v= =
min . ε .l ε .l
v
v’ = (enkel bij i.f.v. [S])
[E ]
[S ]
Opstellen Hanes-grafiek: [S] i.f.v.
v'
Legende:
v: reactiesnelheid in M.min-1
v’: reactiesnelheid afhankelijk van enzymconcentratie in mol.(U.min) -1
∆E/min = b: richtingscoëfficiënt van de rechte die verkregen wordt als de extinctie i.f.v. de tijd wordt
uitgezet in min-1
ɛ: molaire extinctiecoëfficiënt van p-NA of p-NF in (M.cm) -1
l: weglengte cuvet = 1 cm
[E]: enzymconcentratie in U.L-1
[S]: substraatconcentratie in M
2
, Bepalen van vmax en Km via de Hanes-transformatie: discontinu methode
1
vmax =
b
a
Km =
b
Legende:
vmax: maximale reactiesnelheid die bereikt kan worden in M.min -1
Km: Michaelis-Menten constante in M
b: rico van de rechte uit de Hanes grafiek
a: y-intercept van de rechte uit de Hanes grafiek
Bepalen van Ki
[I ]
K i = bi
b−1
Legende:
Ki: inhibitorconstante in M
[I]: inhibitorconcentratie in M
bi: rico van de geïnhibeerde reactie uit de Hanes grafiek
b: rico van de niet-geïnhibeerde reactie uit de Hanes grafiek
Statistische verwerking
ei = y i – ÿi
outlier als |ei|> 2*SE
Legende:
ei = residu
yi = voorspelde y-waarde
ÿi = gemeten y-waarde
SE = standaardfout op gevonden rechte
95% betrouwbaarheidsinterval (95% b.i.):
Voor b: [b+t 0,05 R
;8
. SE ( b ) ; b−t 0,05 R
;8
. SE ( b ) ]
2 2
Tabel lijnschatting van een rechte uit een grafiek:
Tabel 1 Legende tabel lijnschatting
b a
SE(b) SE(a)
R2 SE
F df
SSreg Ssres
3 Legende
Tabel 2 Legendetabel
Afkorting Betekenis
p-NF paranitrofenol
p-NA paranitroaniline
BAPNA Benzoyl-arginine-p-nitroanilide
p-NPP paranitrofenylfosfaat
3
Les avantages d'acheter des résumés chez Stuvia:
Qualité garantie par les avis des clients
Les clients de Stuvia ont évalués plus de 700 000 résumés. C'est comme ça que vous savez que vous achetez les meilleurs documents.
L’achat facile et rapide
Vous pouvez payer rapidement avec iDeal, carte de crédit ou Stuvia-crédit pour les résumés. Il n'y a pas d'adhésion nécessaire.
Focus sur l’essentiel
Vos camarades écrivent eux-mêmes les notes d’étude, c’est pourquoi les documents sont toujours fiables et à jour. Cela garantit que vous arrivez rapidement au coeur du matériel.
Foire aux questions
Qu'est-ce que j'obtiens en achetant ce document ?
Vous obtenez un PDF, disponible immédiatement après votre achat. Le document acheté est accessible à tout moment, n'importe où et indéfiniment via votre profil.
Garantie de remboursement : comment ça marche ?
Notre garantie de satisfaction garantit que vous trouverez toujours un document d'étude qui vous convient. Vous remplissez un formulaire et notre équipe du service client s'occupe du reste.
Auprès de qui est-ce que j'achète ce résumé ?
Stuvia est une place de marché. Alors, vous n'achetez donc pas ce document chez nous, mais auprès du vendeur Chemist123. Stuvia facilite les paiements au vendeur.
Est-ce que j'aurai un abonnement?
Non, vous n'achetez ce résumé que pour €17,48. Vous n'êtes lié à rien après votre achat.
Peut-on faire confiance à Stuvia ?
4.6 étoiles sur Google & Trustpilot (+1000 avis)
80364 résumés ont été vendus ces 30 derniers jours
Fondée en 2010, la référence pour acheter des résumés depuis déjà 14 ans