Resume
Volledige samenvatting van het vak Identificatie, karakterisatie en kwantificatie van biomoleculen
- Établissement
- Universiteit Antwerpen (UA)
Volledige samenvatting, met verduidelijkende afbeeldingen
[Montrer plus]
Aperçu du contenu
Samenvatting Identificatie, karakterisatie en kwantificatie van biomoleculen 2e BA BMW1 Analytische performantie, kwaliteitscontrole en kalibratie
1.1 Analytische performantie
• Kwalitatieve analyse: identificatie, detectie of aantonen van bestanddelen in staal
• Kwantitatieve analyse: informatie omtrent relatieve hoeveelheid (gehalte, concentratie)
o Individuele analyse
o Groepsanalyse
• Specificiteit: wanneer de reactie enkel opgaat met het te doseren bestanddeel
o Kan verbeterd worden door aanpassen parameters
o Liefst 100% specificiteit = geregistreerd signaal is enkel afkomstig van analyt
• Selectiviteit: kan voorkeur vertonen voor het te doseren bestanddeel,
maar zal ook reageren op andere bestanddelen
• Gevoeligheid (sensiviteit) van een methode wordt bepaald door helling
ijkcurve = gemeten signaal/concentratie
o Karakteristieke concentratie = hoeveelheid te bepalen stof die
een absorbantie van 0,0044 teweegbrengt
o Uitstekende referentie voor afstellen en kalibreren
apparatuur/controleren of analyse betrouwbaar is.
• Detectielimiet (LOD)
o = Minimale concentratie van de te bepalen stof die in staat is
om signaal te veroorzaken die het dubbele is van het
achtergrondsignaal
o Groter analytisch belang dan gevoeligheid
o Signal/Noise ratio = 2
• Kwantificatielimiet (LOQ)
o = Laagste concentratie van de te bepalen stof die
kwantitatief kan worden bepaald
• Blancobepaling: bepaling van de fractie van totaalsignaal dat niet te
wijten is aan het te doseren bestanddeel in het te analyseren staal
• Accuraatheid: Dit is een maat voor de afwijking van de gemeten waarde tegenover de
werkelijke waarde.
𝑔𝑒𝑚𝑖𝑑𝑑𝑒𝑙𝑑𝑒 𝑠𝑡𝑎𝑎𝑙
o 𝑔 ∗ 100
𝑐𝑜𝑛𝑐𝑒𝑛𝑡𝑟𝑎𝑡𝑖𝑒 𝑖𝑛
𝑙
o PROBLEEM IN DE ACCURAATHEID: verschuiving van het gemiddelde (μ).
• Precisie: Dit is een maat voor de reproduceerbaarheid van analyseresultaten
o Intra-variatiecoëfficiënt: de gemiddelde afwijking tegenover het gemiddelde binnen
dezelfde run en dus onder dezelfde condities
o Inter-variatiecoëfficiënt: de gemiddelde afwijking tegenover het gemiddelde bij
verschillende runs
o Variatie coëfficiënt: VC = SD/μ → reflecteert de imprecisie
o PROBLEEM IN DE PRECISIE: stijging van de standaardafwijking (SD).
1.2 Kwaliteitscontrole van biochemische analyse
Extern, 3 stalen/maand
1.3 Kalibratie van biochemische analyse
Externe kalibratie: wanneer bekomen resultaat niet onderhevig is aan matrixeffecten (bv analyse
van serum tov waterige standaard)
• = directe kalibratie
1
,Samenvatting Identificatie, karakterisatie en kwantificatie van biomoleculen 2e BA BMW
• Eenpuntskalibratie: Sx (signaal onbekend staal) vergeleken met signaal van kalibrator
o Nadeel:
▪ Lineariteit dient vooraf geverifieerd
▪ Accuraatheid hangt af van slechts 1 ijkpunt
• Ijklijn (meerpuntskalibratie): verdunningsreeks van een standaardoplossing van de te
doseren component met gekende concentratie
o Meten binnen lineair meetbereik
o NOOIT concentratie meten die niet in ijklijn staat!
Interne kalibratie: wanneer gegenereerde signaal onderhevig is aan matrix/chemische interferentie
of de methode/meetapparatuur fluctuerende experimentele parameters hebben.
• Standaardadditiemethode: wanneer hoogte gegenereerd signaal verschilt tgv verschil in
samenstelling van de matrix tussen standaardoplossingen en matrix van het te analyseren
staal + tussen stalen onderling (bv verschillende serumstalen).
Wordt toegepast per staal, wanneer de optredende interferentie met de standaard oplossing
verschillend is per staal.
o Enkelvoudige methode: Er wordt een bekende hoeveelheid standaardoplossing
(bevat hetzelfde analyt) toegevoegd aan het onbekende staal en het signaal wordt
vergeleken met het onbekende staal waarin een gelijk volume water werd
toegevoegd (finale volumes moeten gelijk zijn).
▪ Nadelen:
• Lineariteit moet vooral geverifieerd zijn
• Accuraatheid hangt slechts af van 1 ijkpunt
o Meervoudige methode: Er wordt een verdunningsreeks opgesteld van de standaard
oplossing en bij het onbekend staal toegevoegd.
▪ Voordeel: betere controle van de lineaire range
▪ Nadelen: Tijdrovend + voor sommige analyses kunnen relatief grote
hoeveelheden van het te analyseren staal nodig zijn.
• Additiecalibratiemethode: wordt toegepast wanneer samenstelling van verschillende te
analyseren monsters geen effect heeft op het genereerde signaal van de stalen onderling
maar er wel duidelijk matrixeffecten waar te nemen zijn in vergelijking tot bv een waterige
standaard.
• Methode van de inwendige standaard: IS verschilt van de te doseren component
o IS wordt vanaf begin toegevoegd → ondergaat dezelfde manipulaties →
automatische correctie
o Verhouding Cx/Cs blijft onveranderd
o Finaal gemeten signaal SIS wordt bij elk staal gerelateerd aan de toegevoegde
hoeveelheid IS.
o Corrigeert automatisch voor matrixinterferentie en schommelingen van
experimentele parameters
IS moet voldoen aan enkele vereisten:
• IS mag niet voorkomen in het te analyseren staal
• Signaal van IS en het te bepalen element dient simultaan te kunnen worden gemeten
• IS dient chemisch sterk verwant te zijn met het te bepalen element
• Signalen van het te doseren bestanddeel en IS mogen niet samenvallen
2
,Samenvatting Identificatie, karakterisatie en kwantificatie van biomoleculen 2e BA BMW
1.4 Verschillende fasen van de biochemische analyse
• Monstername
• Voorbereiden van het monster
• Procedures voor eliminatie van interferenties of aanrijking van de concentratie
• Bepaling zelf
1.5 Verschillende fouten van de biochemische analyse
In elke stap kan een fout zitten
Systematische fouten
• Instrumentele fouten
• Methodische fouten
• Persoonlijke fouten
Toevallige fouten
Verwerpen van resultaten
• Outliers
o De afwijking > 4 keer de gemiddelde afwijking
o De afwijking > 3 keer de standaard deviatie
2 Spectrometrische analysemethoden
• Licht kan interfereren met atomaire en/of moleculaire stelsels
• Spectrometrische analysemethoden berusten op interactie tussen materie en
elektromagnetische straling.
• Elektromagnetische straling: transversaal: oscillerende magnetische velden
• Hoe lager de frequentie, hoe lager de E, hoe langer de golflengte
Relevante golfparameters:
• Frequentie (v): aantal oscillaties per seconde. Uitgedrukt in Hertz (Hz) 𝑣= 1/𝑇
• Periode (T): tijd nodig voor 1 oscillatie. Uitgedrukt in seconden (s). Onafhankelijk van het
medium
• Golflengte (λ): de lineaire afstand tussen 2 opeenvolgende punten in dezelfde fase.
Uitgedrukt in nanometer (nm) voor het UV-VIS, micrometer (μm) voor het IR spectrum en in
Ångström (Å) voor X-stralen. 𝜆 =c/v
• Golfgetal (ṽ): geeft aan hoeveel golven er voorkomen per lengte-eenheid. ṽ=1/𝜆
• Voortplantingssnelheid (v): de snelheid waarmee de straling zich door de ruimte voortplant.
𝑣 = 𝜆𝑣 = 𝜆 /𝑇
• De complementaire golflengte zal geabsorbeerd worden en de complementaire kleur
van rood is groen. Als de oplossing groen absorbeert zal rood worden doorgelaten.
3
, Samenvatting Identificatie, karakterisatie en kwantificatie van biomoleculen 2e BA BMW
Bij absorptie van straling wordt het atoom of de molecule op een hoger energie niveau gebracht.
• Energietoename is gelijk aan de hoeveelheid geabsorbeerde straling = EXCITATIE of
aangeslagen toestand
3 transiteeprocessen in moleculen:
• Rotatie-energietransities: moleculen kunnen roteren rond verschillende assen
• Vibratie-energietransities: atomen kunnen relatief van elkaar trillen binnen een molecule
• Elektronen-energietransities: elektronen worden naar een energierijker obitaal
getransfereerd
Oplopende energie: rotatie (ver IR) < vibratie (nabij IR) < elektronen (UV-VIS)
• UV-VIS spectra zijn dus samengesteld uit hun elektronenspectrum en talrijke rotaties en
vibraties
→door overlap van de energieovergangen: verlies van resolutie
→men verkrijgt een banden- of continu spectrum
• Atomen: enkel elektronen-energietransities (kunnen niet vibreren/roteren zoals moleculen)
→discreet lijnspectrum
Frequentiebetrekking
Absorptie van straling gebeurt enkel wanneer de stralingsenergie juist gelijk is aan het
energieverschil tussen de grondtoestand en aangeslagen toestand.
→ algemene frequentiebetrekking van Bohr: ∆𝐸=h𝑣= h 𝑐/𝜆
v = frequentie in Hertz
λ = golflengte in nm, μm of Å
c = lichtsnelheid = 3 x 108 m/s
h = constante van Planck = 6,626 x 10-34 J.sec
E = energie in Joule
• Bij toenemende energie daalt de golflengte
• Frequentie is evenredig aan de energie
3 Basisprincipes van stralingsabsorptie
• Molecule kan roteren rond verschillende assen. Door toevoer van energie kan een weinig
roterend molecule sterker beginnen roteren
→ gequantiseerde rotatie-energietransities
• Atomen of atoomgroepen kunnen in een molecule relatief t.o.v. elkaar trillen
→ gequantiseerde vibratie-energieniveaus
• Elektronen in een molecule of atoom kunnen (bij UV of VIS van de buitenste schaal) naar
meer energierijke orbitalen worden getransfereerd
→ gequantiseerde elektronenovergangen
Indeling van de spectroscopische analysetechnieken
• Aan de hand van de golflengte van de gebruikte straling (UV-VIS, IR, ...)
• Aan de hand van gemeten interacties
o Absorptietechnieken
o Emissietechnieken
• Moleculair of atomair
• Fase: vaste fase, suspensie, gasfase, hittebronnen, ...
4
Les avantages d'acheter des résumés chez Stuvia:
Qualité garantie par les avis des clients
Les clients de Stuvia ont évalués plus de 700 000 résumés. C'est comme ça que vous savez que vous achetez les meilleurs documents.
L’achat facile et rapide
Vous pouvez payer rapidement avec iDeal, carte de crédit ou Stuvia-crédit pour les résumés. Il n'y a pas d'adhésion nécessaire.
Focus sur l’essentiel
Vos camarades écrivent eux-mêmes les notes d’étude, c’est pourquoi les documents sont toujours fiables et à jour. Cela garantit que vous arrivez rapidement au coeur du matériel.
Foire aux questions
Qu'est-ce que j'obtiens en achetant ce document ?
Vous obtenez un PDF, disponible immédiatement après votre achat. Le document acheté est accessible à tout moment, n'importe où et indéfiniment via votre profil.
Garantie de remboursement : comment ça marche ?
Notre garantie de satisfaction garantit que vous trouverez toujours un document d'étude qui vous convient. Vous remplissez un formulaire et notre équipe du service client s'occupe du reste.
Auprès de qui est-ce que j'achète ce résumé ?
Stuvia est une place de marché. Alors, vous n'achetez donc pas ce document chez nous, mais auprès du vendeur angelika0804. Stuvia facilite les paiements au vendeur.
Est-ce que j'aurai un abonnement?
Non, vous n'achetez ce résumé que pour €11,39. Vous n'êtes lié à rien après votre achat.
Peut-on faire confiance à Stuvia ?
4.6 étoiles sur Google & Trustpilot (+1000 avis)
79373 résumés ont été vendus ces 30 derniers jours
Fondée en 2010, la référence pour acheter des résumés depuis déjà 14 ans