Exam (elaborations)
practice 6 plasmid isolation and restriction enzyme digestion
- Course
- Institution
practice 6 plasmid isolation and restriction enzyme digestion
[Show more]
Seller
Follow
KimLinda
Content preview
lOMoARcPSD|11700591Práctica 6. Aislamiento de plásmido y Digestión con enzimas
de restricción
Bioquímica Experimental (Universidad Nacional Autónoma de México)
StuDocu is not sponsored or endorsed by any college or university
Downloaded by Answerdone (arshadhussain57172@gmail.com)
, lOMoARcPSD|11700591
0141-Bioquímica Experimental________ Facultad de Química
Grupo 6 ● Ago-Nov (2018-1) ● Optativa Disciplinaria
Tipo: Experimental ● 6 créditos L-307 / Edificio B
● Lun 4:00-6:00 p.m. y Mie 4:00-8:00 p.m.
Profesores: Dr. Euclides Ávila Chávez y Dra. Carmen Adriana Mendoza Rodríguez
Purificación y ensayo de restricción del plásmido recombinante
pET-TEM1-ompAβ-lactamasa
en células transformantes de E. coli BL21 (DE3)
Por: Gutiérrez Silvestre Jessica / Durán Iturbide Noemí Ángeles / Carrasco Mote Leonardo
Depto. Bioquímica, Facultad de Química, UNAM.
Circuito Exterior S/N, Copilco El Bajo, Cd. Universitaria. 04510 Coyoacán, México, Ciudad de México, CDMX.
Correo de correspondencia: jessi.g.silvestre@comunidad.unam.mx
RESUMEN
Se empleó el método de lisis alcalina, donde se lisan las membranas de las células mediante un
detergente SDS y un choque alcalino con NaOH y se precipita el plásmido recombinante con
isopropanol, para luego digerirlo con enzimas de restricción BamHI y NdeI debido a que el vector
utilizado en la transformación tiene dos sitios de restricción para enzimas diferentes de manera que
cortando con estas dos enzimas se libera sólo el fragmento de interés; se procedió a cargar en un gel de
agarosa al 1% teñido con EtBr y se observó con respecto a un marcador de tamaño molecular del
bacteriófago lambda digerido con HindIII. En los resultados se muestran 3 carriles con diferentes pesos
moleculares, correspondientes a: el plásmido híbrido~6456 p.b., otro fragmento con peso molecular
que corresponde al plásmido digerido con las 2 enzimas de ~5370 p.b. y un fragmento de peso
molecular de ~1284 p.b. (inserto).
Palabras clave: Endonucleasas-enzimas de restricción provenientes de Eubacterias y Arqueas.
BamHI: enzima de restricción descubierta en Bacillus amyloliquefaciens. NdeI: enzima de restricción
aislada de Neisseria denitrificans. p.b.: pares de bases.
INTRODUCCIÓN
se pueden insertar u obtener utilizando enzimas
Los plásmidos son moléculas pequeñas de ADN
de restricción (usualmente las de tipo II). Para
circular que se replican de manera autónoma en
asegurar que las bacterias transformadas poseen
procariontes. Debido a su capacidad de
el vector recombinante con la secuencia de
replicarse rápidamente, se utilizan como
interés se utiliza una técnica de monitoreo
vectores de clonación de genes de interés, el cual
genotípico: aislamiento de plásmido y
Downloaded by Answerdone (arshadhussain57172@gmail.com)
The benefits of buying summaries with Stuvia:
Guaranteed quality through customer reviews
Stuvia customers have reviewed more than 700,000 summaries. This how you know that you are buying the best documents.
Quick and easy check-out
You can quickly pay through credit card or Stuvia-credit for the summaries. There is no membership needed.
Focus on what matters
Your fellow students write the study notes themselves, which is why the documents are always reliable and up-to-date. This ensures you quickly get to the core!
Frequently asked questions
What do I get when I buy this document?
You get a PDF, available immediately after your purchase. The purchased document is accessible anytime, anywhere and indefinitely through your profile.
Satisfaction guarantee: how does it work?
Our satisfaction guarantee ensures that you always find a study document that suits you well. You fill out a form, and our customer service team takes care of the rest.
Who am I buying these notes from?
Stuvia is a marketplace, so you are not buying this document from us, but from seller KimLinda. Stuvia facilitates payment to the seller.
Will I be stuck with a subscription?
No, you only buy these notes for $7.46. You're not tied to anything after your purchase.
Can Stuvia be trusted?
4.6 stars on Google & Trustpilot (+1000 reviews)
72349 documents were sold in the last 30 days
Founded in 2010, the go-to place to buy study notes for 14 years now